Microaula em Método CELULA • Prévia Aberta

<p>Ferramentas enzimáticas fundamentais para a manipulação de ácidos nucleicos: endonucleases de restrição tipo II (extremidades cegas vs. coesivas), DNA ligase do bacteriófago T4, fosfatases alcalinas e DNA polimerases de alta fidelidade. Arquitetura genética e tipos de vetores de clonagem e expressão: plasmídeos bacterianos, vetores de levedura (YAC, pPIC), vetores virais e cósmídeos. Elementos genéticos regulatórios: promotores constitutivos e induzíveis (sistema lac/IPTG, promotor T7 em E. coli BL21(DE3), promotor pAOX1 dependente de metanol em Pichia pastoris), sítios de ligação ao ribossomo (RBS/Shine-Dalgarno), sequências terminadoras de transcrição e marcadores de seleção por resistência a antibióticos. Tags de purificação por cromatografia de afinidade (His-tag 6x, GST, FLAG-tag) e sítios de clivagem proteolítica específica (trombina, TEV protease). Estratégias modernas de montagem de DNA: clonagem clássica, Gibson Assembly e Golden Gate.</p>

Ferramentas enzimáticas fundamentais para a manipulação de ácidos nucleicos: endonucleases de restrição tipo II (extremidades cegas vs. coesivas), DNA ligase do bacteriófago T4, fosfatases alcalinas e DNA polimerases de alta fidelidade. Arquitetura genética e tipos de vetores de clonagem e expressão: plasmídeos bacterianos, vetores de levedura (YAC, pPIC), vetores virais e cósmídeos. Elementos genéticos regulatórios: promotores constitutivos e induzíveis (sistema lac/IPTG, promotor T7 em E. coli BL21(DE3), promotor pAOX1 dependente de metanol em Pichia pastoris), sítios de ligação ao ribossomo (RBS/Shine-Dalgarno), sequências terminadoras de transcrição e marcadores de seleção por resistência a antibióticos. Tags de purificação por cromatografia de afinidade (His-tag 6x, GST, FLAG-tag) e sítios de clivagem proteolítica específica (trombina, TEV protease). Estratégias modernas de montagem de DNA: clonagem clássica, Gibson Assembly e Golden Gate.

Enzimas de Manipulação do DNA:...