Célula de Ensino evolução que gera resultados
Bacteriologia Clínica, Diagnóstico Microbiológico e Mecanismos de Resistência

Bacteriologia Clínica e Diagnóstica: Isolamento Patogênico, Teste de Sensibilidade (BrCAST), Mecanismos de Resistência e Automação

Formação científica avançada e especialização prática e andragógica no diagnóstico microbiológico de infecções bacterianas comunitárias e nosocomiais. O curso capacita biomédicos, farmacêuticos-bioquímicos, médicos e biólogos no domínio dos fundamentos celulares e tintoriais bacterianos: ultraestrutura da parede celular bacteriana (ácidos teicoicos e camada espessa de peptidoglicano em Gram-positivas vs. membrana externa bilipídica, lipopolissacarídeo - LPS e endotoxina em Gram-negativas); execução e controle de qualidade da Coloração de Gram (cristal violeta, mordente de iodo, descoloração crítica com álcool-acetona e contracoloração com fucsina/safranina); colorações especiais de Ziehl-Neelsen e Kinyoun para bactérias álcool-ácido resistentes (BAAR - Mycobacterium tuberculosis), Albert-Laybourn para grânulos metacromáticos de Corynebacterium diphtheriae e tinta da China (nanquim) para cápsulas. Especializa nas técnicas de semeadura por esgotamento em estrias para isolamento de colônias puras; classificação e fisiologia de meios de cultura: meios enriquecidos (Ágar Sangue de carneiro 5% para leitura de hemólise alfa, beta e gama; Ágar Chocolate para Haemophilus e Neisseria), meios seletivos e diferenciais (Ágar MacConkey e EMB para diferenciação de fermentadores de lactose; Ágar Sal Manitol para estafilococos; Ágar CLED para urocultura; Ágar Salmonella-Shigella e Ágar TCBS para Vibrio); e controle de atmosferas de incubação (aerobiose, capnofilia com 5-10% CO2, microaerofilia para Campylobacter e Helicobacter, e anaerobiose estrita com jarras de anaerobiose). Domina a identificação fenotípica e taxonômica de cocos Gram-positivos: gênero Staphylococcus (teste de catalase, prova da coagulase em tubo/lâmina, DNAse e látex para identificação de S. aureus vs. Estafilococos Coagulase-Negativos S. epidermidis e S. saprophyticus resistente à novobiocina); gênero Streptococcus e Enterococcus (classificação hemolítica e sorológica de Lancefield, teste de sensibilidade à bacitracina e teste PYR para S. pyogenes grupo A, teste de CAMP e hipurato para S. agalactiae grupo B, optoquina e bile-solubilidade para S. pneumoniae, e bile-esculina com NaCl 6,5% para Enterococcus faecalis/faecium); e cocos Gram-negativos (Neisseria meningitidis e N. gonorrhoeae em Ágar Thayer-Martin e Moraxella catarrhalis). Aprofunda a bateria bioquímica de bacilos Gram-negativos: família Enterobacterales (TSI, Citrato de Simmons, SIM/MIO, ureia, VP e indol para identificação de E. coli, Klebsiella, Enterobacter, Proteus com swarming, Salmonella e Shigella) e Bacilos Gram-Negativos Não Fermentadores - BGNNF (Pseudomonas aeruginosa com piocianina e oxidase positiva, Acinetobacter baumannii, Stenotrophomonas maltophilia e Burkholderia cepacia); e bacilos Gram-positivos (Listeria monocytogenes, Bacillus cereus/anthracis e Clostridioides difficile). Especializa no Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA / Antibiograma) padronizado rigorosamente pelas normas do BrCAST/EUCAST: preparo de inóculo na escala 0,5 de McFarland em Ágar Mueller-Hinton, método de difusão em disco (Kirby-Bauer), medição micrométrica de halos, determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM / MIC por microdiluição em caldo e Etest), e categorização clínica interpretativa (Sensível com dose padrão, Sensível aumentando a exposição - I, e Resistente). Culmina na identificação dos mecanismos moleculares e fenotípicos de resistência aos antibióticos: beta-lactamases de espectro estendido (ESBL), carbapenemases (KPC classe A, metalobeta-lactamases NDM/VIM classe B, OXA-48 classe D), Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA mediado pelo gene mecA com triagem por cefoxitina), resistência induzível à clindamicina (D-test positivo), Enterococcus resistente à vancomicina (VRE - VanA/VanB); automação diagnóstica por hemoculturas contínuas (BACTEC, BacT/ALERT), sistemas VITEK 2/Phoenix e espectrometria de massas MALDI-TOF MS; e gestão da qualidade, vigilância de patógenos ESKAPE e controle de infecção hospitalar (CCIH) sob as diretrizes da NBR ISO 15189 e RDC ANVISA nº 786/2023.

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Jornada da trilha

Células de aprendizagem

1

Célula 01: Fundamentos da Bacteriologia Diagnóstica: Morfologia, Fisiologia e Métodos Tintoriais

Ultraestrutura bacteriana e bases físico-químicas da taxonomia morfológica: organização celular de procariotos, cromossomo bacteriano circular único e plasmídeos de resistência transferíveis (plasmídeos R); estrutura comparativa da parede celular: bactérias Gram-positivas (camada espessa e multilamelar de peptideoglicano ou mureína associada a ácidos teicoicos e lipoteicoicos ancorados na membrana citoplasmática, conferindo rigidez osmótica e antigenicidade) versus bactérias Gram-negativas (fina camada de peptideoglicano localizada no espaço periplasmático circundada por membrana externa bilipídica assimétrica contendo fosfolipídios na face interna e lipopolissacarídeo - LPS na face externa; estrutura trimérica do LPS: lipídeo A endotóxico mediador de choque séptico, cerne de oligossacarídeos e cadeia polissacarídica externa antígeno O; presença de proteínas de canal transmembrana porinas); cápsula polissacarídica antifagocítica, fímbrias ou pili (adesinas de adesão celular e pili sexuais de conjugação), flagelos proteicos de motilidade e endosporos de resistência metabólica (gêneros Bacillus e Clostridium). A Coloração de Gram como pilar diagnóstico inicial: fundamentação tintorial passo a passo: 1. Fixação térmica suave do esfregaço na lâmina; 2. Coloração primária com Cristal Violeta (corante básico que penetra em todas as células corando o citoplasma em roxo); 3. Aplicação do Lugol parasitológico/solução iodada (atua como mordente formando um complexo insolúvel volumoso cristal violeta-iodo de elevado peso molecular no interior da malha de peptideoglicano); 4. Etapa crítica de descoloração com solução de álcool-acetona ou álcool etílico a 95%: nas bactérias Gram-negativas o solvente orgânico dissolve os lipídios da membrana externa e aumenta a permeabilidade dos poros da fina camada de peptideoglicano, permitindo a eluição rápida do complexo cristal violeta-iodo e deixando as células translúcidas; nas Gram-positivas o álcool desidrata a espessa camada de peptideoglicano, contraindo seus poros e retendo o corante roxo no interior celular; 5. Contracoloração com Fucsina de Gram ou Safranina: cora as bactérias descoradas em rosa ou vermelho-carmesim; controle de qualidade da lâmina de Gram: avaliação com cepas padrão conhecidas (Staphylococcus aureus ATCC 25923 para cocos Gram-positivos e Escherichia coli ATCC 25922 para bacilos Gram-negativos); principais armadilhas analíticas e causas de erros de interpretação: descoloração excessiva (falsas Gram-negativas por lavagem prolongada com álcool-acetona), subdescoloração (falsas Gram-positivas por descoloração insuficiente), esfregaços excessivamente espessos, culturas velhas em fase de declínio celular com degradação enzimática da parede celular, e pacientes sob antibioticoterapia prévia com alteração morfológica e pleomorfismo bacteriano. Outros métodos tintoriais especializados em bacteriologia médica: 1. Coloração de Ziehl-Neelsen e método de Kinyoun para Bactérias Álcool-Ácido Resistentes (BAAR): fundamentação da parede celular de micobactérias (gênero Mycobacterium, incluindo Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium leprae) rica em ceras e ácidos micólicos de cadeia longa (60 a 90 carbonos) que impedem a penetração de corantes comuns; aquecimento com fucsina fenicada concentrada promovendo a fusão dos lipídios de parede e penetração do corante, seguido de descoloração rigorosa com álcool-ácido a 3% (incapacidade de descorar define o caráter ácido-álcool resistente) e contracoloração com azul de metileno (BAAR coram-se como bacilos delgados vermelhos brilhantes sobre fundo azul); 2. Coloração de Albert-Laybourn para grânulos metacromáticos de polifosfato inorgânico (corpúsculos de Babès-Ernst) em Corynebacterium diphtheriae (bacilos pleomórficos em disposição angular em letras chinesas ou ideogramas); 3. Coloração negativa por Tinta da China (nanquim) para visualização do halo capsular refringente em leveduras capsuladas e bactérias encapsuladas; e Exame direto a fresco entre lâmina e lamínula ou gota pendente para avaliação da motilidade bacteriana verdadeira versus movimento browniano.

10h
2

Célula 02: Semeadura, Meios de Cultura, Atmosferas de Incubação e Isolamento Primário

Princípios fundamentais do cultivo e isolamento bacteriano primário: técnicas assépticas de semeadura na bancada laboratorial com uso de bico de Bunsen ou cabine de segurança biológica; técnica de semeadura por esgotamento em estrias com alça bacteriológica calibrada em quatro quadrantes, garantindo a diluição mecânica sucessiva da carga bacteriana até a obtenção de colônias isoladas puras (UFCs - Unidades Formadoras de Colônias derivadas de uma única célula progenitora); semeadura quantitativa em uroculturas com alça calibrada de 1 microlitro (0,001 mL) ou 10 microlitros (0,01 mL) para contagem de colônias por mL de urina e definição de bacteriúria significativa (>= 10^5 UFC/mL). Classificação funcional e formulação bioquímica dos meios de cultura: 1. Meios Basais e Meios Enriquecidos: Ágar Sangue de carneiro a 5% (meio enriquecido universal não seletivo com base de ágar triptona de soja ou infusão de coração-cérebro suplementada com sangue desfibrinado de carneiro; avaliação dos padrões de hemólise bacteriana: alfa-hemólise com lise parcial de eritrócitos e formação de halo esverdeado ao redor da colônia por redução de hemoglobina em metemoglobina, beta-hemólise com lise completa dos glóbulos vermelhos com formação de halo totalmente transparente e incolor, e gama-hemólise indicando ausência de hemólise); Ágar Chocolate (preparado por adição de sangue de carneiro ao ágar aquecido a 80°C promovendo a lise térmica dos eritrócitos com liberação de hemina / fator X e nicotinamida adenina dinucleotídeo / NAD / fator V, essencial para o cultivo de bactérias fastidiosas exigentes como Haemophilus influenzae e Neisseria gonorrhoeae); 2. Meios Seletivos e Diferenciais: Ágar MacConkey: o meio de triagem padrão para bacilos Gram-negativos; seletivo pela incorporação de sais biliares e corante cristal violeta que inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas; diferencial pela inclusão do carboidrato lactose e do indicador de pH vermelho neutro: bactérias fermentadoras de lactose (Lactose-positivas como Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae) produzem ácidos orgânicos que reduzem o pH abaixo de 6,8, precipitando os sais biliares e tornando as colônias e o meio circundante em tom rosa-choque ou magenta intenso; bactérias não fermentadoras de lactose (Lactose-negativas como Salmonella, Shigella, Proteus e Pseudomonas) utilizam peptona gerando subprodutos alcalinos com pH elevado, desenvolvendo colônias translúcidas incolores; Ágar Eosina Azul de Metileno (EMB / Teague): diferencia fermentadores de lactose com formação de colônias negras com reflexo verde metálico característico em Escherichia coli; Ágar Sal Manitol (Chapman): meio com alta concentração de cloreto de sódio (7,5% NaCl) seletivo para o gênero halotolerante Staphylococcus, contendo manitol e indicador vermelho de fenol (Staphylococcus aureus fermenta o manitol virando o meio de vermelho para amarelo brilhante; Staphylococcus epidermidis cresce sem fermentar manitol, mantendo o meio vermelho); Ágar CLED (Cistina-Lactose-Eletrólito-Deficiente): meio deficiente em eletrólitos para urocultura que impede o fenômeno indesejado de espalhamento em onda (swarming) de Proteus mirabilis; Ágar Salmonella-Shigella (SS) e Ágar Hektoen com tiossulfato de sódio e citrato férrico para evidenciação de sulfeto de hidrogênio (H2S com centro negro nas colônias de Salmonella); e Ágar TCBS (Tiossulfato-Citrato-Bile-Sacarose) seletivo para Vibrio cholerae. Atmosferas e condições de incubação microbiana: controle termostático a 35-37°C; 1. Aerobiose: incubação em estufa bacteriológica convencional sob atmosfera ambiente; 2. Capnofilia: atmosfera enriquecida com 5% a 10% de CO2 obtida por incubadoras gasosas com injeção de CO2 ou sistema de vela em jarra hermética, necessária para o crescimento vigoroso de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae e Neisseria meningitidis; 3. Microaerofilia: atmosfera contendo teor reduzido de oxigênio (5% O2, 10% CO2 e 85% N2) obtida por envelopes geradores de gás específicos para cultivo de Campylobacter jejuni (incubado a 42°C) e Helicobacter pylori; e 4. Anaerobiose Estrita: sistemas herméticos de jarras de anaerobiose ou câmara de fluxo contínuo com envelopes químicos geradores de hidrogênio e CO2 catalisados por paládio com indicador redox de azul de metileno ou resazurina (tiras indicadoras tornam-se brancas em ausência total de O2), fundamental para o isolamento de anaeróbios patogênicos como Clostridioides difficile, Clostridium tetani, Clostridium perfringens e Bacteroides fragilis.

10h
3

Célula 03: Cocos Gram-Positivos e Cocos Gram-Negativos de Relevância Médica

Taxonomia, fatores de patogenicidade e identificação laboratorial de cocos Gram-positivos e Gram-negativos de interesse clínico: 1. Gênero Staphylococcus: cocos Gram-positivos agrupados tipicamente em cachos irregulares ('estafilococos'); teste primário da Catalase com peróxido de hidrogênio a 3%: reação positiva imediata com efervescência vigorosa de oxigênio gasoso (diferenciação imediata em relação ao gênero Streptococcus que é catalase-negativo); identificação de Staphylococcus aureus: Teste da Coagulase em tubo (leitura após 4 e 24 horas avaliando a conversão do fibrinogênio em coágulo de fibrina estável pela coagulase livre) e em lâmina (fator de aglutinação / clumping factor aderente à parede); teste da DNAse em placa de ágar DNA com viragem de halo transparente após adição de HCl 1N; aglutinação em látex sensibilizado para detecção de Proteína A e antígenos capsulares; e fatores de virulência: enterotoxinas estafilocócicas termoestáveis causadoras de intoxicação alimentar, toxina esfoliativa na síndrome da pele escaldada, toxina da síndrome do choque tóxico (TSST-1) e leucocidina de Panton-Valentine (PVL); Estafilococos Coagulase-Negativos (ECN): Staphylococcus epidermidis (principal colonizador de pele humana, patógeno oportunista em infecções associadas a biofilmes em cateteres vasculares, válvulas cardíacas e próteses ortopédicas), Staphylococcus saprophyticus (segunda causa mais comum de infecção do trato urinário não complicada em mulheres jovens sexualmente ativas, identificado fenotipicamente pela resistência intrínseca ao disco de novobiocina 5 mcg com halo < 16 mm em Ágar Sangue ou Mueller-Hinton) e Staphylococcus lugdunensis (ECN atípico com virulência assemelhada a S. aureus e PYR positivo). 2. Gênero Streptococcus e Gênero Enterococcus: cocos Gram-positivos dispostos em pares e cadeias; classificação hemolítica (alfa, beta e gama-hemólise) associada à classificação sorológica de Rebecca Lancefield baseada nos carboidratos C da parede celular: Estreptococos Beta-Hemolíticos: Streptococcus pyogenes (Grupo A de Lancefield: colônias pequenas com halo largo de beta-hemólise nítida; teste de sensibilidade ao disco de Bacitracina 0,04 UI com halo de inibição em qualquer diâmetro e teste da L-pirrolidonil-arilamidase / Teste PYR fortemente positivo; causador de faringoamigdalite purulenta, erisipela, escarlatina, glomerulonefrite difusa aguda pós-estreptocócica e febre reumática mediada por mimetismo molecular da proteína M); Streptococcus agalactiae (Grupo B de Lancefield: halo estreito de beta-hemólise; teste de CAMP positivo com formação de zona hemolítica triangular em ponta de flecha na interseção perpendicular com estria de S. aureus em Ágar Sangue, e prova da hidrólise do hipurato de sódio positiva; rastreamento pré-natal obrigatório entre a 35ª e 37ª semanas de gestação para profilaxia intraparto contra sepse e meningite neonatal precoce); Estreptococos Alfa-Hemolíticos: Streptococcus pneumoniae (pneumococo: diplococos Gram-positivos lanceolados encapsulados com colônias mucoides ou umbilicadas com depressão central por autólise; identificação fenotípica definitiva pela sensibilidade ao disco de Optoquina / hidrocloreto de etil-hidrocupreína 5 mcg com halo de inibição >= 14 mm em Ágar Sangue sob 5% CO2 e Teste de Solubilidade em Bile positivo com desoxicolato de sódio a 10% promovendo lise bacteriana rápida e clareamento da suspensão turva) versus Estreptococos do Grupo Viridans (Streptococcus mutans, S. mitis resistentes à optoquina e insolúveis em bile, agentes de endocardite bacteriana subaguda); Gênero Enterococcus (Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium): cocos Gram-positivos tolerantes a condições estressantes; identificação laboratorial pelo crescimento e enegrecimento do Ágar Bile-Esculina (hidrólise da esculina com formação de esculetina que reage com íons ferro gerando complexo negro), crescimento com turvação em caldo contendo cloreto de sódio a 6,5% (NaCl 6,5%) e teste PYR positivo. 3. Cocos Gram-Negativos: Neisseria meningitidis (meningococo: agente de meningite e meningococcemia fulminante com púrpura fulminans) e Neisseria gonorrhoeae (gonococo: agente da gonorreia e doença inflamatória pélvica): diplococos Gram-negativos em grão de café ou rim com lados achatados voltados um para o outro, frequentemente visualizados no interior de neutrófilos em esfregaços de líquor e secreção uretral; bactérias fastidiosas cultivadas em Ágar Thayer-Martin enriquecido com vancomicina, colistina, nistatina e trimetoprima para inibição de microbiota contaminante; testes bioquímicos: oxidase positiva estrita (oxidação imediata do reagente tetrametil-p-fenilenodiamina com viragem para azul-escuro/púrpura em 10 segundos), catalase positiva e perfil de degradação de carboidratos em meio CTA (Cystine Trypticase Agar): N. meningitidis oxida glicose e maltose; N. gonorrhoeae oxida apenas glicose; e Moraxella catarrhalis (diplococo Gram-negativo respiratório, oxidase positiva, catalase positiva, asacarolítico em CTA, produtor de DNAse e butirato esterase).

10h
4

Célula 04: Bacilos Gram-Negativos (Enterobacterales e Não Fermentadores) e Bacilos Gram-Positivos

Taxonomia, vias metabólicas e baterias bioquímicas para identificação de bacilos Gram-negativos e Gram-positivos de interesse clínico: 1. Ordem Enterobacterales (Enterobactérias): bacilos Gram-negativos facultativos de grande impacto em infecções urinárias, intra-abdominais e sepse hospitalar; características fisiológicas comuns: oxidase-negativos (ausência de citocromo c oxidase, com exceção do gênero Plesiomonas), catalase-positivos, fermentadores obrigatórios de glicose (com ou sem produção de gás hidrogênio e dióxido de carbono) e redutores de nitrato a nitrito; Bateria Bioquímica Clássica em Tubos: Ágar Tríplice Açúcar e Ferro (TSI - Triple Sugar Iron): base de ágar contendo 0,1% de glicose no fundo, 1% de lactose e 1% de sacarose na rampa/bisel, tiossulfato de sódio e sulfato ferroso para detecção de H2S; interpretação de reações após 18-24 horas: fundo ácido amarelo (A) por fermentação de glicose; bisel ácido amarelo (A) por fermentação de lactose e/ou sacarose (padrão A/A típico de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Enterobacter cloacae); bisel alcalino vermelho (K) por exaustão da glicose e utilização oxidativa de peptonas em bactérias não fermentadoras de lactose/sacarose (padrão K/A típico de Salmonella spp., Shigella spp. e Proteus mirabilis); presença de bolhas ou quebra do ágar indicando produção de gás; e enegrecimento por precipitação de sulfeto ferroso indicando produção de H2S (Salmonella e Proteus mirabilis); Ágar Citrato de Simmons: utilização do citrato de sódio como única fonte de carbono e sais de amônio como fonte de nitrogênio com indicador azul de bromotimol (reação positiva com crescimento e viragem de verde para azul royal intenso em Klebsiella, Enterobacter e Salmonella; reação negativa permanecendo verde em E. coli e Shigella); Meio SIM (Sulfeto, Indol e Motilidade) e Meio MIO: motilidade pela turvação difusa além da linha de picada; produção de indol pela clivagem do triptofano pela enzima triptofanase, evidenciada pelo anel vermelho na superfície após adição do Reagente de Kovacs (indol positivo em Escherichia coli, Proteus vulgaris e Klebsiella oxytoca; indol negativo em Klebsiella pneumoniae e Proteus mirabilis); Teste de Vermelho de Metila (VM) e Voges-Proskauer (VP): via da fermentação ácida mista (VM positivo em E. coli) versus via do butanodiol com produção de acetoína (VP positivo em Klebsiella e Enterobacter); e Prova da Hidrólise da Ureia (Ágar Ureia de Christensen com indicador vermelho de fenol): hidrólise rápida com viragem para rosa choque brilhante em Proteus spp. (urease rápida patognomônica) e Klebsiella pneumoniae. 2. Bacilos Gram-Negativos Não Fermentadores (BGNNF): bactérias estritamente aeróbias que não utilizam carboidratos por via fermentativa: Pseudomonas aeruginosa: bacilo Gram-negativo aeróbio estrito, oxidase-positiva imediata, móvel por flagelo polar único, produção característica de pigmentos fenazínicos (piocianina azul e pioverdina verde fluorescente solúvel em água conferindo coloração verde-azulada e fluorescência sob luz UV nas colônias), odor adocicado característico de aminoacetofenona ('cheiro de uva' ou 'tortilha de milho') e utilização oxidativa da glicose demonstrada no meio OF de Hugh-Leifson (tubo aberto amarelo e tubo selado verde); Acinetobacter baumannii: cocobacilo Gram-negativo pleomórfico imóvel, oxidase-negativo, sacarolítico ou asacarolítico, de extrema persistência ambiental hospitalar em fômites e ventiladores mecânicos; Stenotrophomonas maltophilia: bacilo oxidase-negativo, catalase-positiva, móvel, caracterizado por resistência intrínseca universal a todos os antimicrobianos carbapenêmicos devido à produção constitutiva de metalobeta-lactamase cromossômica L1; e Burkholderia cepacia (patógeno oportunista em fibrose cística). 3. Bacilos Gram-Positivos de Relevância Médica: Esporulados: Gênero Bacillus: Bacillus anthracis (agente do antraz / carbúnculo, bacilo imóvel, capsulado, colônias com aspecto de 'cabeça de Medusa' e não hemolítico em Ágar Sangue) versus Bacillus cereus (móvel, beta-hemolítico, causador de intoxicação alimentar emeta e diarreica); Gênero Clostridioides e Clostridium (anaeróbios estritos esporulados): Clostridioides difficile (agente da colite pseudomembranosa e diarreia associada a antibióticos mediada pelas exotoxinas A enterotóxica e B citotóxica detectadas por ELISA ou PCR fecal), Clostridium tetani (esporos terminais deformantes em 'baqueta de tambor' com produção de tetanospasmina) e Clostridium perfringens (gangrena gasosa com dupla zona concêntrica de beta-hemólise em Ágar Sangue); Não Esporulados: Listeria monocytogenes: bacilo Gram-positivo curto intracelular facultativo, móvel com padrão característico de 'cambalhota' em gota pendente a 25°C e imóvel a 37°C, catalase-positiva, beta-hemólise estreita discreta, teste de CAMP positivo, hidrólise da esculina positiva e capacidade de replicação em temperaturas de refrigeração (4°C / psicrotrófica), sendo causa crítica de listeriose invasiva, sepse e meningoencefalite em gestantes, recém-nascidos e idosos; e Corynebacterium diphtheriae (difteria).

10h
5

Célula 05: Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA / Antibiograma) segundo o BrCAST/EUCAST

Metrologia analítica, padronização e interpretação clínica do Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA / Antibiograma) em conformidade com as diretrizes normativas oficiais do BrCAST (Comitê Brasileiro do Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos) e EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing): padronização crítica do inóculo bacteriano na escala 0,5 de McFarland (\(1{,}5 imes 10^8 ext{ UFC/mL}\)) utilizando espectrofotômetro a 625 nm (absorbância 0,08 a 0,13) ou densitômetro calibrado a partir de colônias frescas com 18 a 24 horas de crescimento; consequências analíticas de desvios do inóculo (inóculo excessivo gerando falsos halos reduzidos e falsa resistência; inóculo insuficiente gerando halos aumentados espúrios). Métodos Fenotípicos de Teste de Sensibilidade: 1. Método de Difusão em Disco (Kirby-Bauer modificado): semeadura uniforme em tapete confluente em três direções com swab estéril em placas de Ágar Mueller-Hinton (espessura rigorosa de 4 mm +/- 0,5 mm; espessura < 3 mm produz halos artificialmente aumentados e espessura > 5 mm produz halos artificialmente diminuídos; pH controlado entre 7,2 e 7,4; concentração padronizada de cátions divalentes cálcio e magnésio essenciais para reprodutibilidade de aminoglicosídeos e polimixinas); para bactérias exigentes (Streptococcus pneumoniae, Streptococcus grupos A, B, C, G e Haemophilus): utilização de Ágar Mueller-Hinton suplementado com 5% de sangue de carneiro desfibrinado e 20 mg/L de beta-NAD (MH-F); aplicação de discos de papel filtro calibrados com massa antimicrobiana padronizada dentro do tempo máximo de 15 minutos pós-semeadura; incubação a 35°C +/- 1°C em aerobiose ou 5% CO2 por 16 a 20 horas; medição milimétrica rigorosa do diâmetro dos halos de inibição com paquímetro digital ou régua calibrada contra fundo escuro não reflexivo; 2. Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM / MIC - Minimum Inhibitory Concentration): a menor concentração de um agente antimicrobiano capaz de inibir o crescimento bacteriano visível a olho nu; microdiluição em caldo em microplacas de 96 poços contendo caldo Mueller-Hinton com diluições seriadas dobradas (ex.: 0,125; 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 8; 16... mg/L): método padrão-ouro de referência internacional mandatório para avaliação de colistina e vancomicina (para as quais a difusão em disco não é permitida pelo BrCAST devido à difusão errática de moléculas grandes); e Método de Fita de Gradiente de Concentração (Etest / M.I.C.Evaluator): tira plástica calibrada com gradiente exponencial contínuo pré-definido de antimicrobiano, permitindo a leitura direta do valor de CIM no ponto de interseção da elipse de inibição com a escala da fita. A Nova Nomenclatura e Categorização Clínica Interpretativa do BrCAST/EUCAST: superação da antiga definição ambígua de 'Intermediário': 1. Sensível (S): alta probabilidade de sucesso terapêutico utilizando o regime posológico padrão recomendado em bula; 2. Sensível Aumentando a Exposição (I - antigamente 'Intermediário'): sucesso terapêutico assegurado desde que a exposição ao fármaco seja aumentada através do ajuste do regime de dosagem (dose mais elevada, infusão prolongada ou contínua) ou pela concentração fisiologicamente elevada do fármaco no sítio da infecção (ex.: concentração maciça de beta-lactâmicos na urina em infecções urinárias baixas); 3. Resistente (R): alta probabilidade de falha terapêutica mesmo com aumento de exposição do antimicrobiano; e Área de Incerteza Técnica (ATU - Area of Technical Uncertainty): faixa de valores limítrofes de halos ou CIM em que fatores analíticos laboratoriais podem gerar classificação incorreta, exigindo do microbiologista a re-testagem da amostra, utilização de método alternativo ou comunicação de alerta com nota interpretativa no laudo médico.

10h
6

Célula 06: Mecanismos Moleculares de Resistência Bacteriana, Automação Laboratorial e Infecções Hospitalares

Bases moleculares, classificação enzimática e rastreamento fenotípico e genotípico dos principais mecanismos de resistência aos antimicrobianos em bactérias patogênicas: 1. Resistência aos Beta-Lactâmicos em Bacilos Gram-Negativos: Beta-Lactamases de Espectro Estendido (ESBL / Extended-Spectrum Beta-Lactamases): enzimas plasmidiais que hidrolisam penicilinas, cefalosporinas de 1ª a 4ª geração (ceftriaxona, cefotaxima, ceftazidima, cefepima) e monobactâmicos (aztreonam), sendo inibidas in vitro por inibidores clássicos de beta-lactamases (ácido clavulânico, tazobactam e sulbactam); teste fenotípico de confirmação de ESBL por sinergismo de disco duplo (aproximação a 20 mm de amoxicilina-clavulanato em relação a discos de ceftriaxona, cefotaxima, ceftazidima e cefepima, observando-se a formação característica de 'zona fantasma' ou expansão em ponta de flecha do halo em direção ao inibidor); Carbapenemases: enzimas que inativam carbapenêmicos (meropenem, imipenem, ertapenem), cefalosporinas e penicilinas: Classificação molecular de Ambler: Classe A (serino-carbapenemases: KPC - Klebsiella pneumoniae carbapenemase codificada pelo gene blaKPC, inibida por avibactam e vaborbactam); Classe B (Metalobeta-lactamases - MBLs: enzimas dependentes de zinco como NDM - New Delhi metallo-beta-lactamase, VIM e IMP, inibidas por quelantes de íons como EDTA, resistentes a todos os beta-lactâmicos exceto aztreonam); e Classe D (oxacilinases carbapenêmicas como OXA-48 e OXA-23 em Acinetobacter); testes fenotípicos de detecção rápida: Teste de Inativação de Carbapenêmicos modificado (mCIM / eCIM para discriminação entre serino e metalobeta-lactamase) e discos combinados com inibidores (ácido fenilborônico para KPC e EDTA para MBL). 2. Resistência em Cocos Gram-Positivos: Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA): resistência mediada pela síntese de uma proteína ligadora de penicilina alternativa com afinidade extremamente reduzida para todos os beta-lactâmicos (PBP2a codificada pelo gene mecA ou variante mecC); o teste fenotípico padrão-ouro de triagem laboratorial é o disco de Cefoxitina 30 mcg (halo < 22 mm confirma MRSA e obriga a reporte de resistência a todos os beta-lactâmicos, incluindo penicilinas, cefalosporinas e carbapenêmicos, exceto as cefalosporinas anti-MRSA de 5ª geração como ceftarolina); Resistência induzível à Clindamicina: estafilococos e estreptococos com fenótipo MLSb induzível (resistência cruzada a Macrolídeos, Lincosamidas e Estreptograminas B mediada pela metilação do RNA ribossômico 23S pelo gene erm); teste do D-zone (D-test): colocação do disco de Eritromicina a 15-20 mm do disco de Clindamicina em Ágar Mueller-Hinton (a difusão da eritromicina induz a enzima erm, promovendo um achatamento característico do halo da clindamicina voltado para a eritromicina em formato da letra 'D', indicando que a clindamicina não deve ser utilizada clinicamente pelo risco de falha terapêutica rápida in vivo); e Enterococcus resistente à Vancomicina (VRE): fenótipo VanA (resistência de alto nível a vancomicina e teicoplanina mediada pelo operon vanA com substituição do dipeptídeo D-Ala-D-Ala por D-Ala-D-Lac) versus VanB. 3. Tecnologias de Automação Diagnóstica e Identificação Rápida em Microbiologia: Hemoculturas automatizadas com monitoramento contínuo computadorizado colorimétrico ou fluorimétrico de produção de CO2 por leveduras e bactérias viáveis (sistemas BacT/ALERT e BACTEC), reduzindo o tempo de positividade para poucas horas; Sistemas automatizados de identificação bioquímica em cartões e placas miniaturizadas associados a antibiograma automatizado com leitura turbidimétrica contínua da curva de crescimento para determinação precisa de CIM (sistemas VITEK 2, BD Phoenix e MicroScan); Espectrometria de Massas MALDI-TOF MS (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight): técnica revolucionária de ionização suave por laser e análise de tempo de voo de proteínas ribossômicas bacterianas intactas (geração de espectro proteico único comparado com biblioteca de referência em banco de dados), permitindo a identificação definitiva de espécie bacteriana em menos de 10 minutos a partir de colônias isoladas ou diretamente do sedimento de hemoculturas positivas; e Plataformas Moleculares de PCR Multiplex Sindrômico em cartucho fechado (FilmArray / GeneXpert) com identificação simultânea de patógenos causadores de sepse, meningite e infecções respiratórias associados a marcadores genéticos de resistência (genes mecA, vanA/vanB, blaKPC, blaNDM, blaOXA-48). 4. Gestão da Qualidade, Vigilância Epidemiológica e Controle de Infecção Hospitalar (CCIH): monitoramento estrito do grupo de patógenos ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter spp.) de elevado risco de multirresistência (MDRO); critérios de notificação compulsória imediata à CCIH e vigilância sanitária; protocolos de barreira de contato; auditorias de processos analíticos e conformidade metrológica com a ABNT NBR ISO 15189:2022 e RDC ANVISA nº 786/2023.

10h