Célula de Ensino evolução que gera resultados
Parasitologia Clínica, Diagnóstico Laboratorial e Doenças Tropicais

Parasitologia Clínica e Diagnóstica: Morfologia, Métodos Coproparasitológicos, Hemoparasitologia e Diagnóstico Molecular

Formação científica avançada e especialização prática e andragógica no diagnóstico laboratorial de enteroparasitoses, hemoparasitas e parasitos teciduais de alta relevância clínica e epidemiológica. O curso capacita biomédicos, farmacêuticos-bioquímicos, médicos patologistas clínicos e biólogos no domínio dos fundamentos ecológicos e biológicos das relações parasito-hospedeiro (parasitismo, comensalismo, hospedeiros definitivos/intermediários e vetores). Especializa na execução e interpretação crítica dos principais métodos coproparasitológicos clássicos: sedimentação espontânea (Lutz / Hoffmann, Pons e Janer) para ovos pesados de helmintos e cistos de protozoários; centrifugo-sedimentação em formol-éter (Ritchie / Blagg); métodos de flutuação e centrifugo-flutuação (Faust com sulfato de zinco d=1.180 g/mL e Willis com cloreto de sódio saturado d=1.200 g/mL); métodos especiais de termohidrotropismo para isolamento de larvas vivas de Strongyloides stercoralis (Baermann-Moraes e Rugai); método da fita gomada perianal (método de Graham) para Enterobius vermicularis; e a técnica quantitativa de Kato-Katz para contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e estadiamento da carga parasitária na esquistossomose mansônica e geo-helmintoses. Aprofunda a identificação morfológica de protozoários intestinais e urogenitais: diferenciação microscópica do complexo patogênico Entamoeba histolytica versus comensal Entamoeba dispar e outras amebas não patogênicas (E. coli, Endolimax nana, Iodamoeba bütschlii); diagnóstico de Giardia duodenalis (trofozoítos e cistos) e Trichomonas vaginalis a fresco e sedimentoscopia urinária; e coccídios intestinais oportunistas (Cryptosporidium parvum/hominis, Cystoisospora belli e Cyclospora cayetanensis) por colorações álcool-ácido resistentes (Ziehl-Neelsen modificado e Kinyoun) e epifluorescência UV em imunossuprimidos. Na helmintologia, domina o ciclo biológico, migração tecidual (síndrome de Loeffler) e características morfológicas diagnósticas de ovos e larvas de nematódeos (Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Strongyloides stercoralis, Trichuris trichiura, Enterobius vermicularis), cestódeos (Taenia solium vs. Taenia saginata pela contagem de ramificações uterinas de proglotes grávidas e ganchos no escólex, cisticercose e Hymenolepis nana) e trematódeos (Schistosoma mansoni com espículo lateral). Na hemoparasitologia clássica, especializa no diagnóstico padrão-ouro da Malária por gota espessa volumétrica e esfregaço delgado corados por Giemsa (diferenciação de Plasmodium vivax, P. falciparum, P. malariae e testes rápidos HRP-2/pLDH); diagnóstico da Doença de Chagas (Trypanosoma cruzi) em fase aguda por métodos diretos (gota a fresco, Strout e micro-hematócrito) e fase crônica sorológica; e Leishmanioses (amastigotas em raspado de lesão na LTA e aspirado de medula óssea na Leishmaniose Visceral com teste rK39). Aborda parasitos teciduais como Toxoplasma gondii (sorologia e avidez de IgG na gestação, PCR em líquido amniótico) e ectoparasitoses. Culmina nas tecnologias de vanguarda: detecção de coproantígenos fecais por ELISA, diagnóstico molecular por PCR multiplex e qPCR em tempo real para superar inibidores fecais, e o rigoroso controle de qualidade pré-analítico, analítico (calibração com retículo micrométrico ocular) e pós-analítico conforme as normas da NBR ISO 15189 e RDC ANVISA nº 786/2023.

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Jornada da trilha

Células de aprendizagem

1

Célula 01: Fundamentos da Parasitologia e Métodos Coproparasitológicos de Concentração

Ecologia do parasitismo e relações biológicas entre seres vivos: comensalismo, mutualismo, simbiose e parasitismo estrito; conceitos de hospedeiro definitivo (onde o parasita atinge a maturidade sexual ou realiza reprodução sexuada), hospedeiro intermediário (onde ocorrem estágios larvais ou reprodução assexuada), hospedeiro paratênico ou de transporte, e reservatório natural; vetores biológicos (em que o parasita se multiplica ou desenvolve) versus vetores mecânicos (mero transporte físico de formas infectantes); e ciclos biológicos monoxênicos (ciclo direto em hospedeiro único) versus heteroxênicos (exigência de dois ou mais hospedeiros). Fase pré-analítica em coproparasitologia: critérios de coleta seriada de fezes (recomendação de três amostras colhidas em dias alternados para contornar a eliminação intermitente de cistos e ovos); recipientes plásticos secos, de boca larga, vedação hermética e sem contaminação por urina, água ou solo; e soluções fixadoras e conservantes: solução de formalina a 10% (excelente fixador para ovos e larvas de helmintos e cistos de protozoários), conservante MIF (Mertiomato-Iodo-Formaldeído com coloração intrínseca), SAF (Acetato de Sódio-Ácido Acético-Formalina para imunofluorescência e PCR) e PVA (Álcool Polivinílico para confecção de esfregaços permanentes corados por hematoxilina férrica ou tricrômico de Gomori). Exame macroscópico e microscópico direto a fresco: avaliação de consistência fecal (fezes formadas, pastosas, diarreicas ou aquosas com presença de muco, sangue ou pus); exame direto a fresco entre lâmina e lamínula utilizando solução salina isotônica 0,85% (para observação da motilidade característica de trofozoítos de protozoários como a movimentação ameboide unidirecional de Entamoeba e o movimento 'em folha caindo' de Giardia duodenalis) e solução de Lugol parasitológico (para evidenciação de estruturas nucleares, vacúolos de glicogênio e axonemas em cistos). Métodos físicos de enriquecimento e concentração coproparasitológica: 1. Métodos de Sedimentação Espontânea: Método de Lutz / Hoffmann, Pons e Janer (HPJ): princípio físico da gravidade em cálice cônico de sedimentação por 2 a 24 horas; padrão-ouro universal para triagem de ovos pesados de helmintos (Schistosoma mansoni, Ascaris lumbricoides, Taenia spp.) e cistos de protozoários; 2. Métodos de Centrifugo-Sedimentação: Método de Ritchie / Blagg modificado (centrifugação em formol-éter ou formol-acetato de etila): dissolução de lipídios e detritos fecais pelo solvente orgânico com formação de anel de gordura superior e precipitação das formas parasitárias no sedimento de fundo em tubo de centrífuga cônico; 3. Métodos de Flutuação e Centrifugo-Flutuação: Método de Faust et al. (centrifugação em solução de sulfato de zinco com densidade rigorosamente ajustada a 1.180 g/mL em densímetro): as formas parasitárias com densidade inferior flutuam para a película superficial; método de escolha para cistos de protozoários (Giardia, Entamoeba) e ovos leves de helmintos; Método de Willis (flutuação espontânea em solução saturada de cloreto de sódio com densidade 1.200 g/mL): indicado prioritariamente para ovos leves de ancilostomídeos; e 4. Método Quantitativo de Kato-Katz: princípio da clarificação fecal por glicerina e verde de malaquita em fita de celofane hidrofílica com molde perfurado calibrado (transferência de exatamente 41,7 mg de fezes filtradas em tela metálica ou náilon); contagem microscópica do número total de ovos de Schistosoma mansoni e geo-helmintos multiplicada pelo fator de conversão 24 para cálculo de ovos por grama de fezes (OPG), determinando a intensidade da infecção conforme as diretrizes da Organização Mundial da Saúde (OMS).

10h
2

Célula 02: Protozoologia Intestinal e Urogenital: Trofozoítos, Cistos e Oocistos Oportunistas

Morfologia e fisiopatologia dos protozoários amebianos intestinais: o complexo Entamoeba histolytica (espécie patogênica invasiva causadora de colite amebiana, disenteria amebiana com fezes mucossanguinolentas e abscessos hepáticos amebianos por disseminação hematogênica via veia porta) versus Entamoeba dispar (espécie morfologicamente indistinguível sob microscopia óptica convencional, porém estritamente comensal e não invasiva); caracterização morfológica de trofozoítos de E. histolytica (tamanho de 20 a 40 micrômetros, pseudópodes hialinos direcionados, núcleo esférico com cariossomo central puntiforme e cromatina periférica fina e uniformemente distribuída, e a presença patognomônica de hemácias fagocitadas no citoplasma - eritrofagocitose, critério microscópico definitivo de invasão tecidual por E. histolytica); cistos maduros esféricos medindo de 10 a 15 micrômetros, contendo 1 a 4 núcleos idênticos e corpos cromatoides com extremidades arredondadas em charuto; diferenciação microscópica crítica em relação a protozoários não patogênicos comensais: Entamoeba coli (trofozoítos com cariossomo excêntrico volumoso e cromatina periférica grosseira/irregular; cistos maduros de 15 a 30 micrômetros contendo tipicamente 8 núcleos e corpos cromatoides pontiagudos com pontas afiladas em estilhaço), Endolimax nana (cistos ovais diminutos de 6 a 8 micrômetros com 4 núcleos em borrão nuclear sem cromatina periférica) e Iodamoeba bütschlii (cistos com volumoso vacúolo de glicogênio corado em castanho escuro intenso pelo lugol e núcleo único com cariossomo largo excêntrico). Flagelados do trato digestivo e urogenital: Giardia duodenalis (sinonímias: Giardia lamblia e Giardia intestinalis): biologia celular e fisiopatologia: fixação dos trofozoítos às microvilosidades dos enterócitos no duodeno e jejuno proximal por meio do disco ventral de sucção (adesão adesina-mediada por giardinas), promovendo atrofia vilositária, inflamação local, redução da atividade de dissacaridases e síndrome de má absorção de gorduras (esteatorreia crônica, fezes pálidas e fétidas); morfologia do trofozoíto flagelado: aspecto piriforme em gota d'água de frente e colher de perfil, simetria bilateral com dois núcleos simétricos anterolaterais contendo grandes cariossomos centrais ('aspecto de rosto ou óculos'), corpo parabasal mediano transversal e quatro pares de flagelos (anteriores, posteriores, ventrais e caudais); morfologia do cisto maduro: elipsoide ou oval medindo de 8 a 12 micrômetros, parede cística refratária de camada dupla contendo de 2 a 4 núcleos agrupados em um polo e remanescentes de axonemas e corpos medianos visíveis internamente após coloração por lugol; e Trichomonas vaginalis: protozoário flagelado exclusivo do trato geniturinário humano, causador da tricomoníase (infecção sexualmente transmissível - IST com corrimento vaginal amarelo-esverdeado bolhoso e fétido, prurido vulvovaginal intenso e colo do útero em framboesa / colpite focal na mulher, e uretrite frequentemente assintomática ou com secreção matinal no homem); ausência de estágio cístico no ciclo biológico; morfologia do trofozoíto: piriforme ou ovalado medindo de 10 a 20 micrômetros, com quatro flagelos anteriores livres, um flagelo recorrente formando membrana ondulante que atinge a metade do corpo, axóstilo hialino projetando-se pela extremidade posterior e núcleo ovalado anterior; métodos diagnósticos: exame direto a fresco entre lâmina e lamínula da secreção vaginal ou raspado uretral em solução salina pré-aquecida a 37°C com visualização imediata da motilidade por rotação e oscilação rápida característica, sedimentoscopia urinária e coloração por Giemsa ou Papanicolaou. Coccídios intestinais emergentes e oportunistas: parasitas intracelulares obrigatórios pertencentes ao filo Apicomplexa: Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis (causadores de diarreia autolimitada em imunocompetentes e diarreia crônica volumosa e coleriforme potencialmente fatal em pacientes imunocomprometidos com AIDS e linfócitos T CD4+ < 100 céls/mm3): oocistos esféricos diminutos medindo de 4 a 6 micrômetros contendo quatro esporozoítos livres sem esporocistos; Cystoisospora belli: oocistos elípticos alongados grandes medindo de 20 a 33 micrômetros por 10 a 19 micrômetros, transparentes, contendo inicialmente um esporoblasto único que se divide em dois esporocistos maduros com quatro esporozoítos cada; e Cyclospora cayetanensis: oocistos esféricos medindo de 8 a 10 micrômetros contendo dois esporocistos esféricos; metodologias diagnósticas específicas para coccídios: os oocistos não são visualizados com clareza em métodos coprológicos comuns de rotina devido à sua hialinidade e pequenas dimensões; técnica mandatória de coloração de esfregaços fecais pelo método de Ziehl-Neelsen modificado (método de Kinyoun): a parede rica em lipídios e ceras confere caráter álcool-ácido resistente, corando os oocistos em vermelho carmim brilhante ou magenta contra fundo contrastado em azul de metileno ou verde malaquita; e autofluorescência natural observada sob microscópio de epifluorescência com filtro de luz ultravioleta (330 a 380 nm).

10h
3

Célula 03: Helmintologia Clínica: Nematódeos, Cestódeos, Trematódeos e Diagnóstico Morfológico

Helmintologia médica e taxonomia diagnóstica dos três grandes filos e classes: Nematoda (vermes cilíndricos com tubo digestivo completo e sexos separados), Platyhelminthes Cestoda (vermes achatados em fita, segmentados em proglotes e hermafroditas) e Platyhelminthes Trematoda (vermes achatados foliáceos não segmentados). Nematódeos Intestinais: 1. Ascaris lumbricoides: o maior nematódeo intestinal humano; ciclo biológico com migração cardiopulmonar de larvas (Ciclo de Loeffler: intestino delgado, fígado via veia porta, coração direito, capilares pulmonares, rotura alveolar, ascensão pela árvore traqueobrônquica com tosse seca, broncoespasmo e eosinofilia sanguínea periférica, deglutição e retorno ao jejuno); morfologia dos ovos: ovos férteis (ovais ou arredondados medindo de 45 a 75 micrômetros por 35 a 50 micrômetros, com casca espessa constituída por três camadas: interna vitelina, intermediária de quitina e externa albuminosa mamilonada marrom-dourada rugosa, contendo massa celular central indivisa não embrionada), ovos decorticados (sem a camada mamilonada externa) e ovos inférteis (alongados, maiores, medindo até 90 micrômetros com citoplasma vacuolizado desorganizado e casca fina); 2. Ancilostomídeos (Ancylostoma duodenale com dentes quitinosos e Necator americanus com placas cortantes na cápsula bucal): transmissão por penetração ativa de larvas filarioides L3 na pele ('coceira da terra' / dermatite pruriginosa); migração cardiopulmonar e fixação à mucosa intestinal com espoliação sanguínea crônica mecânica e anticoagulante, gerando anemia microcítica e hipocrômica grave por deficiência de ferro (anemia ancilostomiótica) e hipoalbuminemia; morfologia dos ovos: elípticos de extremidades arredondadas, medindo de 55 a 75 micrômetros por 35 a 40 micrômetros, casca hialina fina e transparente, contendo blastômeros centrais (geralmente 4 a 8 células embrionárias recém-eliminadas); 3. Strongyloides stercoralis: biologia única de parasitismo com alternância entre ciclo de vida livre no solo e ciclo parasitário partenogenético de fêmeas partenogenéticas na mucosa duodenal; autoinfecção interna (transformação precoce de larvas rabditoides L1 em larvas filarioides L3 infectantes ainda no lúmen do cólon, penetrando a mucosa retal ou pele perianal) e autoinfecção externa, mantendo a infecção ativa por décadas sem reexposição; síndrome de hiperinfecção estrongiloidíase e disseminação sistêmica fulminante com bacteremia por translocação de enterobactérias gram-negativas em pacientes sob corticoterapia prolongada ou imunossuprimidos por HTLV-1/neoplasias; diagnóstico morfológico: no exame coproparasitológico de rotina não se observam ovos (que eclodem na mucosa intestinal), mas sim larvas rabditoides L1 vivas com primórdio genital volumoso e vestíbulo bucal curto; métodos específicos de concentração por termohidrotropismo e hidrotropismo positivo: Método de Baermann-Moraes (em funil de vidro com tela metálica e água aquecida a 40-45°C) e Método de Rugai, Mattos e Brizola (em cálice cônico invertido com gaze dobrada); 4. Enterobius vermicularis (oxiúro): hábito biológico peculiar das fêmeas grávidas que migram à noite para a região perianal para deposição de milhares de ovos com prurido anal noturno intenso e vulvovaginite em crianças; ovos raramente encontrados em fezes comuns; método padrão-ouro de escolha: Método de Graham / Fita Adesiva Transparente (fita de celofane colada sobre a região perianal pela manhã antes da higiene íntima e montada sobre lâmina de vidro); morfologia do ovo: assimétrico com um lado plano e outro convexo (formato característico da letra 'D'), casca dupla lisa e transparente, contendo larva visível em seu interior; e 5. Trichuris trichiura (tricocéfalo): morfologia do ovo em formato clássico de barril ou bola de futebol americano com casca espessa de três camadas e dois opérculos ou tampões mucosos hialinos polares salientes; prolapso retal em infecções maciças pediátricas. Cestódeos Intestinais e Teciduais: Taenia solium (do porco) versus Taenia saginata (do boi): morfologia dos ovos idêntica e indistinguível (esféricos de 30 a 40 micrômetros com casca espessa radiada estriada castanha - embrióforo - contendo a oncosfera ou embrião hexacanto com três pares de ganchos); diferenciação morfológica definitiva da espécie baseada no escólex (T. solium com rostelo armado de ganchos e 4 ventosas; T. saginata desarmada com 4 ventosas sem rostelo) e nas proglotes grávidas clarificadas entre lâminas com ácido acético/xilol (T. solium com 7 a 12 ramificações uterinas principais dendríticas de cada lado; T. saginata com 15 a 30 ramificações uterinas finas e dicotômicas de cada lado); o perigo biológico da Cisticercose humana: ingestão acidental de ovos de Taenia solium promovendo a eclosão da oncosfera, penetração vascular e encistamento de cisticercos (Cysticercus cellulosae) no sistema nervoso central (Neurocisticercose com crises epilépticas e hipertensão intracraniana), olhos e músculos estriados; e Hymenolepis nana: ovos arredondados translúcidos contendo embrião hexacanto com dois mamilos polares dos quais partem filamentos filiformes ondulados no espaço entre a casca e o embrióforo. Trematódeos: Schistosoma mansoni: agente etiológico da esquistossomose mansônica (barriga d'água); vermes adultos alojados no plexo mesentérico venoso portal; oviposição de ovos maduros que migram através da parede do cólon para a luz intestinal; retenção de ovos nos capilares hepáticos pré-sinusoidais induzindo reação inflamatória granulomatosa periovular com deposição exuberante de colágeno, formação de fibrose periportal de Symmers 'em cabo de cachimbo' e desenvolvimento de hipertensão portal pré-sinusoidal com esplenomegalia congestiva e varizes esofágicas; e morfologia do ovo: grande, elipsoide medindo de 115 a 175 micrômetros por 45 a 70 micrômetros, casca transparente, contendo miracídio ciliado vivo visível internamente e um espículo lateral conspícuo e pontiagudo voltado para trás.

10h
4

Célula 04: Hemoparasitas e Parasitos Teciduais: Malária, Doença de Chagas e Leishmanioses

Hemoparasitologia clínica e patógenos transmitidos por vetores biológicos hematófagos: 1. Malária Humana: protozoários do gênero Plasmodium: Plasmodium vivax (a espécie mais prevalente nas Américas e no Brasil, caracterizada por paroxismos febris tercãos a cada 48 horas e capacidade de formar formas intra-hepáticas dormentes - hipnozoítos - responsáveis por recidivas clínicas tardias), Plasmodium falciparum (a espécie mais virulenta e potencialmente letal, associada a malária grave com sequestro microvascular cerebral de hemácias parasitadas, citoaderência endotelial, acidose lática e falência de múltiplos órgãos), Plasmodium malariae (paroxismos quartãos a cada 72 horas) e Plasmodium ovale; ciclo biológico heteroxênico com reprodução sexuada esporogônica no mosquito fêmea do gênero Anopheles e reprodução assexuada esquizogônica no homem (fase tecidual pré-eritrocítica no hepatócito e fase eritrocítica nos glóbulos vermelhos com liberação sincronizada de merozoítos gerando febre, calafrios e sudorese); diagnóstico laboratorial padrão-ouro: Exame da Gota Espessa de sangue capilar corada por Giemsa ou azul de metileno/fosfato (Walker): método de elevação da sensibilidade diagnóstica analítica por concentração volumétrica (gota deshemoglobinizada permitindo triagem rápida com visualização de parasitas em campo denso com limite de detecção < 10 a 50 parasitas/microlitro); e Exame do Esfregaço Sanguíneo Delgado corado por Giemsa (fixado previamente com metanol): essencial para a identificação morfológica precisa da espécie de Plasmodium e cálculo da parasitemia percentual: em P. falciparum observam-se anéis delgados trofozoítos jovens pequenos com ponto de cromatina duplo e infecções múltiplas por hemácia, com ausência típica de formas maduras no sangue periférico e presença patognomônica de gametócitos alongados em formato de foice ou banana; em P. vivax observam-se hemácias parasitadas aumentadas de tamanho, reticulócitos preferenciais, trofozoítos ameboides irregulares com pontilhações róseas características de Schüffner e esquizontes maduros contendo de 12 a 24 merozoítos; e Testes de Diagnóstico Rápido imunocromatográficos (RDTs / Rapid Diagnostic Tests) baseados na detecção de antígenos parasitários: proteína rica em histidina 2 (HRP-2 exclusiva de P. falciparum com persistência circulante pós-cura) e desidrogenase lática parasitária (pLDH pan-específica e específica de P. vivax). 2. Doença de Chagas (Tripanossomíase Americana causada pelo hemoflagelado Trypanosoma cruzi): transmissão vetorial por defecação de triatomíneos hematófagos ('barbeiros') durante o repasto sanguíneo, transmissão oral por alimentos contaminados (caldo de cana, polpa de açaí com quadros agudos graves e alta parasitemia), transfusional e congênita; formas evolutivas: amastigotas (intracelulares teciduais arredondadas sem flagelo livre com núcleo e cinetoplasto evidente em ninhos miocárdicos), epimastigotas (multiplicativas no trato digestório do vetor) e tripomastigotas sanguíneos (alongadas em forma de 'C' ou 'S' no sangue circulante com membrana ondulante, flagelo livre anterior e cinetoplasto subterminal volumoso característico); diagnóstico laboratorial da Fase Aguda: marcada por alta parasitemia; métodos parasitológicos diretos imediatos: exame a fresco de sangue entre lâmina e lamínula (detecção da motilidade rápida do parasita entre as hemácias), esfregaço delgado e gota espessa corados por Giemsa, e métodos de concentração como o Método do Micro-hematócrito e Método de Strout (centrifugação de sangue coagulado com leitura do sedimento leucocitário); e diagnóstico laboratorial da Fase Crônica: parasitemia extremamente baixa e inaparente; diagnóstico baseado exclusivamente em métodos sorológicos de detecção de anticorpos IgG anti-T. cruzi por dois métodos de princípios antigênicos distintos (ELISA com antígenos recombinantes, Imunofluorescência Indireta - IFI ou Quimioluminescência - CLIA), com critério de confirmação por positividade concordante. 3. Leishmanioses (Leishmania spp.): transmitidas pela picada de fêmeas de flebotomíneos ('mosquito-palha' dos gêneros Lutzomyia e Phlebotomus); formas evolutivas: promastigotas (alongadas flageladas no inseto vetor) e amastigotas (intracelulares obrigatórias em macrófagos de mamíferos, de formato oval medindo 2 a 4 micrômetros com núcleo e cinetoplasto em bastonete corados intensamente em azul e púrpura por Giemsa); Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA por Leishmania braziliensis, Leishmania guyanensis e Leishmania amazonensis): manifestações cutâneas com úlcera indolor de bordas elevadas e em moldura ('úlcera de Bauru') e formas mucosas destrutivas; diagnóstico laboratorial direto por raspado da borda interna da úlcera, biópsia tecidual ou aposição (imprint) corados por Giemsa para visualização direta de formas amastigotas intra e extracelulares em macrófagos, cultura em meio NNN (Novy-MacNeal-Nicolle) e teste imunológico celular de hipersensibilidade tardia (Intradermorreação de Montenegro - IDRM); e Leishmaniose Visceral (LV / Calazar por Leishmania infantum / Leishmania chagasi): infecção sistêmica crônica grave do sistema reticuloendotelial com febre prolongada, esplenomegalia maciça, hepatomegalia, pancitopenia (anemia, leucopenia e plaquetopenia) e hipergamaglobulinemia policlonal; diagnóstico definitivo por aspiração de medula óssea, baço ou linfonodo com pesquisa direta de amastigotas em macrófagos e teste imunocromatográfico rápido recombinante rK39.

10h
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Célula 05: Parasitologia de Tecidos e Líquidos Biológicos: Toxoplasmose e Ectoparasitos

Biologia, patogenia e diagnóstico laboratorial da Toxoplasmose: agente etiológico Toxoplasma gondii (coccídio intracelular cosmopolita); ciclo biológico heteroxênico facultativo: hospedeiros definitivos (felídeos domésticos e silvestres nos quais ocorre reprodução sexuada no epitélio intestinal com eliminação ambiental de oocistos não esporulados nas fezes) versus hospedeiros intermediários (todos os mamíferos de sangue quente e aves, incluindo o ser humano); três formas morfológicas evolutivas: 1. Taquizoítos: forma proliferativa móvel em arco ou meia-lua medindo de 4 a 7 micrômetros, responsável pela infecção aguda ativa, replicação rápida em qualquer célula nucleada, invasão celular ativa com formação de vacúolo parasitóforo e disseminação hematogênica transplacentária; 2. Bradizoítos: forma de replicação lenta e latente encistada no interior de cistos teciduais com parede resistente no sistema nervoso central, retina e musculatura estriada/cardíaca (infecção crônica latente que persiste por toda a vida do hospedeiro com risco de reativação encefálica ou ocular em quadros de imunossupressão grave por AIDS); e 3. Oocistos esporulados: forma de resistência ambiental contendo dois esporocistos com quatro esporozoítos cada, transmitidos por ingestão de água, vegetais crus ou carne crua/malcozida contendo cistos teciduais. Diagnóstico laboratorial da Toxoplasmose Gestacional e Congênita: rastreamento sorológico obrigatório no pré-natal por ensaios imunoenzimáticos automatizados (ELISA, Quimioluminescência - CLIA ou ECLIA): 1. Interpretação dos anticorpos IgM e IgG: presença de IgG positiva com IgM negativa caracteriza imunidade pregressa protetora adquirida antes da concepção (ausência de risco de transmissão congênita); ausência de IgG e IgM caracteriza gestante suscetível (necessidade de acompanhamento sorológico trimestral e orientações preventivas); positividade simultânea de IgM e IgG no primeiro trimestre gestacional exige obrigatoriamente a realização do Teste de Avidez de IgG: a avidez dos anticorpos IgG contra antígenos de T. gondii aumenta gradualmente ao longo dos primeiros meses pós-infecção primária; avidez de IgG elevada (> 60%) em gestante com menos de 16 semanas de idade gestacional descarta categoricamente infecção aguda adquirida durante a gravidez (confirmando que a infecção ocorreu há pelo menos 4 a 6 meses, antes da concepção, não havendo indicação de intervenção terapêutica fetal invasiva); baixa avidez de IgG (< 30%) sugere infecção recente com risco de transmissão transplacentária vertical; e diagnóstico fetal confirmatório através de amniocentese após a 18ª semana de gestação com pesquisa direta do DNA de T. gondii no líquido amniótico por PCR em tempo real (qPCR). Toxoplasmose Ocular (retinocoroidite com lesões exsudativas satélites cicatrizadas e ativas) e Neurotoxoplasmose no paciente imunocomprometido/HIV (lesões cerebrais focais com realce anelar em tomografia/ressonância magnética e confirmação por PCR no líquor). Outros parasitos teciduais de relevância médica: Toxocaríase humana (Larva Migrans Visceral - LMV e Larva Migrans Ocular - LMO causada pela ingestão acidental de ovos embrionados de Toxocara canis e Toxocara cati eliminados por cães e gatos, caracterizada por hipereosinofilia persistente, hepatomegalia e diagnóstico sorológico por ELISA-IgG); e Larva Migrans Cutânea ('bicho geográfico' por penetração de larvas de Ancylostoma braziliense e Ancylostoma caninum com túneis serpiginosos eritematosos e pruriginosos na pele). Ectoparasitos de Importância Médica e Diagnóstico Dermatológico: Sarcoptes scabiei var. hominis: ácaro microscópico escavador causador da Escabiose humana (sarna): fêmeas grávidas escavam túneis intradérmicos na camada córnea da pele nas regiões interdigitais, punhos, axilas e genitália; diagnóstico laboratorial confirmatório por exame parasitológico direto de raspado de lesão cutânea com lâmina de bisturi umedecida em óleo mineral ou hidróxido de potássio (KOH 10%) e observação microscópica direta do ácaro ovalado de 0,3 mm, ovos translúcidos ou fezes microscópicas (cíbalos); Pediculose e Ftiríase: Pediculus humanus capitis (piolho do couro cabeludo), Pediculus humanus corporis e Phthirus pubis ('chato' na região pubiana); e Miíases humanas: infestação tecidual por larvas de dípteros: Miíase Furunculóide (causada pela larva de Dermatobia hominis / mosca-varejeira com nódulo subcutâneo doloroso e orifício central secretor de serosidade com extremidade respiratória espiracular posterior da larva) e Miíases Cavitárias ou Traumáticas (por Cochliomyia hominivorax em feridas abertas com destruição tecidual rápida).

10h
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Célula 06: Métodos Imunológicos, Diagnóstico Molecular em Parasitologia e Gestão da Qualidade

Fronteiras analíticas contemporâneas no laboratório de parasitologia médica: 1. Pesquisa de Coproantígenos Fecais por Imunoensaios: superação das limitações diagnósticas intrínsecas da microscopia óptica convencional decorrentes da eliminação intermitente de cistos, oocistos e ovos nas fezes; ensaios imunoenzimáticos (ELISA sanduíche em microplacas) e ensaios imunocromatográficos de fluxo lateral (testes rápidos POCT) para detecção direta de antígenos solúveis de superfície e toxinas parasitárias em amostras fecais frescas ou conservadas: coproantígenos de Giardia duodenalis (antígeno de parede cística de 65 kDa - GSA-65), Cryptosporidium spp. e do complexo Entamoeba histolytica; e kits combinados multiplex de alta sensibilidade e especificidade (> 95%) com detecção simultânea dos três enteropatógenos em fezes diarreicas, dispensando a presença física de formas intactas íntegras observáveis ao microscópio. 2. Diagnóstico Molecular Aplicado à Parasitologia Clínica: Reação em Cadeia da Polimerase convencional e PCR em Tempo Real (qPCR quantitativo): princípios de desenho de primers e sondas fluorescentes TaqMan voltados para regiões conservadas do DNA ribossômico (genes 18S rDNA, ITS-1 e ITS-2) e genes de cópia única de protozoários e helmintos; principais aplicações diagnósticas de alta precisão: diferenciação molecular definitiva entre Entamoeba histolytica (genes da lectina Gal/GalNAc) e Entamoeba dispar; detecção ultrassensível e diferenciação de espécies de Plasmodium (P. falciparum, P. vivax, P. malariae) em casos de malária com parasitemia submimicroscópica e infecções mistas; genotipagem de cepas de Toxoplasma gondii e espécies de Leishmania (discriminação entre L. braziliensis e L. amazonensis para prognóstico de acometimento mucoso); desafios pré-analíticos e analíticos da extração de DNA parasitário a partir de fezes humanas: presença maciça de inibidores potentes da DNA polimerase na matriz fecal (ácidos biliares, bilirrubina, polissacarídeos complexos de dieta vegetal, lipídios e excesso de DNA bacteriano da microbiota intestinal); e protocolos especializados de lise mecânica rigorosa por esferas de zircônio (Bead Beating para rompimento de paredes espessas de cistos e oocistos), purificação em colunas de sílica ou nanopartículas magnéticas com agentes quelantes (PVPP e resinas de troca iônica), e uso obrigatório de controle interno de amplificação exógeno em cada reação para validação de ausência de inibição analítica de PCR. 3. Gestão da Qualidade Total e Boas Práticas em Parasitologia Laboratorial conforme a ABNT NBR ISO 15189:2022 e RDC ANVISA nº 786/2023: Fase Pré-Analítica: POP de orientação ao paciente com coleta seriada correta, armazenamento e proporção adequada entre fezes e fixador (1 parte de fezes para 3 partes de conservante); critérios de aceitação e rejeição de amostras coprológicas (recipientes vazando, contaminação por urina, amostras ressecadas sem conservante ou tempo de transporte inadequado para trofozoítos); Fase Analítica: microscopia óptica com manutenção preventiva periódica, alinhamento de iluminação de Köhler, e calibração periódica do retículo micrométrico ocular: calibração com lâmina padrão micrométrica de estágio (micrômetro de platina graduado em divisões de 10 e 100 micrômetros) calculando o fator de calibração para cada objetiva (10x, 40x e 100x de imersão) para medição precisa do diâmetro de cistos, oocistos e ovos em micrômetros (essencial para diferenciar cistos de E. histolytica de 12 um de cistos de E. hartmanni < 10 um); constituição e manutenção de parasitoteca física de referência e atlas digital interno com lâminas positivas e negativas arquivadas para treinamento continuado e Controle Interno da Qualidade (CQI); participação mandatória em programas de Ensaio de Proficiência / Controle Externo da Qualidade (CQE / PNCQ e Controllab) com análise de concordância interobservador pelo índice Kappa; e Fase Pós-Analítica: padronização da nomenclatura taxonômica científica (grafia em itálico com gênero maiúsculo e espécie minúscula), semiquantificação de formas parasitárias por cruzes (+ a ++++) ou número por campo, e laudos integrados de conformidade diagnóstica.

10h