Célula de Ensino evolução que gera resultados
Virologia Clínica, Diagnóstico Molecular e Vírus Emergentes

Virologia Clínica e Diagnóstica: Biologia Viral, Diagnóstico Molecular (RT-qPCR), Sorologia, Arboviroses e Vírus Emergentes

Formação analítica avançada e especialização prática e andragógica no diagnóstico laboratorial de infecções virais agudas, crônicas, congênitas e emergentes. O programa capacita biomédicos, farmacêuticos-bioquímicos, médicos e biólogos no domínio da biologia viral fundamental: organização macromolecular dos virions, genomas de DNA e RNA segundo a Classificação de Baltimore (Classes I a VII: dsDNA, ssDNA, dsRNA, (+)ssRNA, (-)ssRNA, retrovírus e hepadnavírus com transcriptase reversa); estrutura do capsídeo proteico (simetrias icosaédrica, helicoidal e complexa), matriz proteica (M) e envelope bilipídico com glicoproteínas espiculares (espículas / spikes de adsorção e penetração, como hemaglutinina, neuraminidase, proteína S do SARS-CoV-2 e gp120/gp41 do HIV); etapas do ciclo replicativo intracelular obrigatório (adsorção a receptores celulares específicos, penetração por fusão ou endocitose, desnudamento, transcrição, replicação genômica, tradução, clivagem proteolítica por proteases virais e brotamento ou lise). Domina a fase pré-analítica virológica: coleta com swabs sintéticos estéreis de rayon ou dacron com haste plástica flexível (contraindicação absoluta de swabs de algodão e hastes de madeira devido a inibidores de PCR e formaldeído), Meio de Transporte Viral (VTM/UTM) isotônico tamponado a pH 7,2-7,4 com antibióticos e antifúngicos, preservação da cadeia de frio estrita (+2°C a +8°C por até 72h e -80°C para estabilidade de RNA viral termolábil), punção venosa em tubos com anticoagulante EDTA (contraindicação mandatória de heparina, potente inibidor da enzima Taq polimerase) e critérios analíticos de rejeição de amostras. Especializa nas metodologias moleculares quantitativas de alta sensibilidade: extração e purificação automatizada de ácidos nucleicos por colunas de sílica ou microesferas magnéticas (beads); Transcrição Reversa acoplada à PCR em tempo real (RT-qPCR) com sondas de hidrólise fluorogênicas de hibridização específica (tecnologia TaqMan com fluoróforos reporter FAM/VIC e quencher BHQ baseados em transferência de energia por ressonância de Förster - FRET) e corantes intercalantes (SYBR Green I com análise da curva de dissociação térmica / melting); interpretação do ciclo de quantificação (Cq / Ct - Cycle threshold); quantificação absoluta da Carga Viral plasmática em cópias/mL e Unidades Internacionais (UI/mL); validação de controles internos endógenos (RNase P humana) e prevenção de contaminação por carreamento (uso de dUTP e enzima Uracil-DNA Glicosilase - UDG); além de painéis sindrômicos multiplex em cartucho fechado para patógenos respiratórios e meningoencefalites. Disseca as metodologias sorológicas e imunológicas automatizadas: cinética da resposta imune antiviral, janela imunológica diagnóstica e testes de avidez de IgG (maturação de afinidade por eluição com ureia 6M); imunoensaios de Quimioluminescência (CLIA) e Eletroquimioluminescência (ECLIA) com micropartículas magnéticas e éster de acridínio/rutênio (emissão de resultados em RLU e índices de cut-off S/CO); testes rápidos imunocromatográficos de fluxo lateral (PoCT) com ouro coloidal; e testes confirmatórios de Western Blot e Immunoblot recombinante. Aprofunda o diagnóstico integrado das Hepatites Virais: algoritmo sorológico e molecular da Hepatite B (HBsAg, Anti-HBc Total, Anti-HBc IgM, Anti-HBs quantitativo protetor >= 10 mUI/mL, HBeAg, Anti-HBe, Carga Viral de HBV-DNA e identificação de hepatite oculta e mutantes pré-core); Hepatite C (algoritmo reflexo de triagem sorológica com Anti-HCV seguido imediatamente de confirmação molecular por HCV-RNA quantitativo por RT-qPCR, Resposta Virológica Sustentada - RVS e genotipagem viral); e hepatites delta (HDV), HAV e HEV. Domina o algoritmo oficial de 4ª geração para o HIV (detecção combinada e simultânea do antígeno p24 e anticorpos Anti-HIV-1/2, reduzindo a janela imunológica para 10 a 14 dias), quantificação de Carga Viral HIV-1 RNA, monitoramento de Linfócitos T CD4+/CD8+ por citometria de fluxo, testes genotípicos de resistência antirretroviral (TARV), HTLV-1/2 e a família Herpesviridae (HSV-1, HSV-2, VZV, CMV com monitoramento preemptivo em transplantados e EBV). Coroa com o manejo laboratorial das Arboviroses transmitidas por Aedes aegypti (Dengue com detecção do antígeno NS1 e RT-qPCR nos primeiros 5 dias de febre, sorologia IgM/IgG e vigilância de plaquetopenia e hemoconcentração; Chikungunya e Zika vírus em sangue e urina com correlação em síndrome congênita e microcefalia; e Febre Amarela); Vírus Respiratórios Sazonais e Pandêmicos (Influenza A/B com drift e shift antigênico, Vírus Sincicial Respiratório e SARS-CoV-2 por RT-qPCR e antígeno Spike/Nucleocapsídeo); e patógenos virais emergentes e reemergentes de relevância em saúde pública (Mpox por qPCR de lesões cutâneas, Vírus Oropouche - OROV, febres hemorrágicas e hantavírus), biossegurança laboratorial (NB-2, NB-3 e NB-4) e notificação compulsória imediata segundo as diretrizes da NBR ISO 15189 e RDC ANVISA nº 786/2023.

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Jornada da trilha

Células de aprendizagem

1

Célula 01: Biologia Viral, Estrutura Macromolecular, Ciclos Replicativos e Coleta de Espécimes

Princípios fundamentais da virologia médica e organização físico-química dos agentes virais: natureza acelular dos vírus como parasitas intracelulares obrigatórios estritos desprovidos de metabolismo autônomo e de maquinário ribossomal de síntese proteica; arquitetura macromolecular do virion maduro: genoma viral constituído exclusivamente por um único tipo de ácido nucleico (DNA ou RNA, de fita simples ou dupla, linear, circular ou segmentado); a Classificação de Baltimore como sistema taxonômico padrão baseado no mecanismo de biossíntese de RNA mensageiro (mRNA): Classe I (vírus de DNA fita dupla - dsDNA, ex.: Herpesviridae, Adenoviridae e Poxviridae); Classe II (vírus de DNA fita simples - ssDNA, ex.: Parvoviridae / Parvovírus B19); Classe III (vírus de RNA fita dupla - dsRNA, ex.: Reoviridae / Rotavírus); Classe IV (vírus de RNA fita simples senso positivo - (+)ssRNA cujo genoma atua diretamente como mRNA traduzível pelos ribossomos do hospedeiro, ex.: Flaviviridae / Dengue e Coronaviridae / SARS-CoV-2); Classe V (vírus de RNA fita simples senso negativo - (-)ssRNA que transportam obrigatoriamente a enzima RNA polimerase dependente de RNA no virion para sintetizar a fita positiva complementar, ex.: Orthomyxoviridae / Influenza e Rhabdoviridae / Raiva); Classe VI (retrovírus de RNA fita simples com intermediário de DNA catalisado pela enzima viral transcriptase reversa, ex.: Retroviridae / HIV-1 e HTLV); e Classe VII (vírus de DNA fita dupla com transcriptase reversa e intermediário de RNA pré-genômico, ex.: Hepadnaviridae / Hepatite B). Estrutura do capsídeo proteico protetor formado por subunidades proteicas denominadas capsômeros: simetria icosaédrica (poliedro regular de 20 faces triangulares equiláteras e 12 vértices), simetria helicoidal (capsômeros dispostos em espiral cilíndrica envolvendo o ácido nucleico) e simetria complexa; vírus nus (capsídeo exposto diretamente ao ambiente, altamente resistentes à dessecação, solventes lipídicos, detergentes e pH ácido estomacal, transmitidos frequentemente por via fecal-oral, ex.: Enterovírus, Norovírus e HAV) versus vírus envelopados (capsídeo circundado por bicamada lipídica originada de membranas celulares do hospedeiro durante o brotamento, contendo glicoproteínas virais inseridas, extremamente lábeis ao calor, éter e dessecação, transmitidos por gotículas respiratórias, sangue ou contato íntimo sexual, ex.: HIV, Influenza, Herpes e SARS-CoV-2); papel fundamental das espículas glicoprotéicas (spikes): proteínas de fixação viral que se ligam com alta especificidade estereoespecífica a receptores e correceptores celulares da membrana plasmática da célula hospedeira (tropismo tecidual), mediando a fusão de membranas ou a penetração celular. Etapas sequenciais do ciclo replicativo viral: 1. Adsorção / fixação; 2. Penetração (endocitose mediada por receptor ou fusão direta do envelope com a membrana celular); 3. Desnudamento / liberação do genoma no citoplasma ou núcleo; 4. Expressão gênica precoce e replicação do genoma; 5. Síntese e clivagem proteolítica de poliproteínas por proteases virais; 6. Morfogênese e montagem dos novos capsídeos; e 7. Liberação (por brotamento na membrana plasmática ou lise celular com morte do hospedeiro). Boas práticas na fase pré-analítica de espécimes virológicos: 1. Coleta de swab respiratório (nasofaringe e orofaringe): utilização mandatória e exclusiva de swabs estéreis sintéticos de haste plástica flexível com ponta de dacron, rayon ou poliéster (alerta rigoroso de contraindicação analítica: swabs de algodão comum e hastes de madeira são formalmente proibidos porque contêm fibras de celulose que sequestram ácidos nucleicos, resíduos de formaldeído e substâncias quelantes inibidoras da enzima Taq polimerase em ensaios de PCR); 2. Meio de Transporte Viral (VTM / UTM): solução salina balanceada tamponada isotônica (pH 7,2 a 7,4) contendo albumina bovina ou gelatina como estabilizadores proteicos e coquetel de antimicrobianos (gentamicina, anfotericina B) para inibir o sobrecrescimento de bactérias e fungos contaminantes da flora comensal; 3. Conservação e cadeia de frio analítica: transporte refrigerado imediato entre +2°C e +8°C por no máximo 48 a 72 horas pós-coleta; para períodos superiores de armazenamento ou transporte interinstitucional, as amostras de RNA viral devem ser obrigatoriamente congeladas a -80°C (ou em gelo seco a -70°C), evitando-se ciclos repetidos de congelamento e descongelamento que fragmentam o ácido nucleico; 4. Coleta de sangue para virologia molecular e sorologia: punção a vácuo com anticoagulante EDTA (tubo tampa roxa) para obtenção de plasma rico em virions íntegros (contraindicação absoluta de heparina / tubo tampa verde, pois a heparina é uma molécula polianiônica que mimetiza o DNA e inibe irreversivelmente a Taq polimerase); separação do plasma por centrifugação em até 4 horas.

10h
2

Célula 02: Métodos Diagnósticos Moleculares em Virologia: Extração, RT-qPCR e Carga Viral

Fundamentação metodológica e metrológica das técnicas moleculares padrão-ouro em virologia clínica: 1. Extração e Purificação de Ácidos Nucleicos Virais (DNA e RNA): etapas químicas fundamentais: lise celular e desproteinização de capsídeos virais mediada por tiocianato de guanidina (agente caotrópico desnaturante que inativa ribonucleases celulares ubíquas - RNases) e detergentes tensoativos (Triton X-100 ou SDS); digestão enzimática com Proteinase K; métodos modernos automatizados de captura em fase sólida: colunas de sílica com centrifugação e microesferas magnéticas paramagnéticas (magnetic beads) revestidas com sílica ou polímeros funcionais: os ácidos nucleicos ligam-se reversivelmente à sílica na presença de altas concentrações de sais caotrópicos e etanol; sucessivas lavagens hidroalcoólicas para eluição e remoção completa de proteínas, lipídios, sais residuais e inibidores solúveis; etapa de secagem e eluição final em água pura livre de nucleases (DEPC-treated water) ou tampão TE de baixa força iônica; avaliação de pureza por espectrofotometria microvolumétrica (leitura de absorbância UV nas razões A260/A280 ~ 1,8 para DNA e ~ 2,0 para RNA puro, e razão A260/A230 > 1,8 indicando ausência de resíduos caotrópicos). 2. Transcrição Reversa acoplada à PCR em Tempo Real (RT-qPCR): metodologia de referência internacional para detecção e quantificação de genomas de RNA viral: etapa de síntese de cDNA complementar catalisada pela enzima Transcriptase Reversa (geralmente linhagem modificada termoestável da enzima de Moloney Murine Leukemia Virus - M-MLV RT) utilizando oligonucleotídeos iniciadores (primers) específicos para o gene alvo ou hexâmeros aleatórios; etapa de amplificação enzimática em termociclador em tempo real por uma DNA polimerase termoestável quimicamente modificada para ativação por calor ('Hot-Start Taq DNA Polymerase', minimizando amplificações inespecíficas e dímeros de primers a baixas temperaturas); química de detecção por fluorescência: Sondas de Hidrólise Fluorogênicas TaqMan (sistema padrão-ouro para virologia diagnóstica): oligonucleotídeos específicos que hibridizam internamente na sequência alvo delimitada pelos primers; a sonda possui um fluoróforo repórter (Reporter dye, ex.: FAM, VIC, HEX, Cy5) covalentemente ligado à sua extremidade 5' e uma molécula supressora de fluorescência (Quencher dye, ex.: BHQ-1, TAMRA) na extremidade 3'; em estado intacto, a emissão do repórter é suprimida pela proximidade física do quencher através do fenômeno de FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer); durante a fase de extensão do ciclo de PCR, a atividade exonucleásica 5' -> 3' intrínseca da enzima Taq polimerase hidrolisa e cliva especificamente a sonda hibridizada ao molde, liberando fisicamente o fluoróforo repórter do efeito do quencher, gerando um sinal fluorescente proporcional e cumulativo a cada ciclo de amplificação gerado. 3. Cinética e Análise Quantitativa de Amplificação: curva sigmoide de amplificação dividida em fase basal (ruído de fundo), fase exponencial precoce, fase linear e fase de platô (por esgotamento de reagentes e inibição por produtos); definição do Limiar de Fluorescência (Threshold) ajustado na região média da fase geométrica exponencial; ciclo de quantificação (Cq / Ct - Cycle threshold): o ciclo exato em que a emissão de fluorescência da amostra cruza o threshold: relação logarítmica inversamente proporcional: valores de Ct baixos indicam alta concentração inicial de genoma viral (alta carga viral), enquanto valores de Ct elevados refletem baixa carga viral inicial; quantificação absoluta da Carga Viral: interpolação do valor de Ct da amostra em uma curva-padrão de calibração linear construída a partir de diluições seriadas decimais de padrões quantificados conhecidos, expressando o resultado final em cópias de RNA/mL ou Unidades Internacionais por mililitro (UI/mL); limites analíticos: Limite Inferior de Detecção (LoD - menor concentração detectável em 95% dos ensaios) e Limite Inferior de Quantificação (LoQ); controle de qualidade interno: incorporação mandatória de Controle Interno Endógeno (ex.: gene da RNase P humana) para atestar a qualidade celular da coleta e a ausência de inibidores da PCR na reação; Controle Interno Exógeno (fago MS2 ou vírus não patogênico) adicionado no momento da extração para monitorar o rendimento da extração; Controles Negativos de Extração (CNE) e Controle Negativo de Reação (NTC - sem molde) para atestar ausência de contaminação cruzada; e prevenção de contaminação por 'carry-over' mediante substituição de dTTP por dUTP na reação associada à enzima Uracil-DNA Glicosilase (UDG / UNG). 4. Painéis Sindrômicos Multiplex: plataformas automatizadas 'sample-to-answer' em cartucho fechado e microfluídica capazes de amplificar simultaneamente múltiplos alvos virais em uma única amostra clínica em menos de 1 hora (ex.: painéis respiratórios com 20 alvos patogênicos e painéis para meningites/encefalites virais em líquor).

10h
3

Célula 03: Diagnóstico Sorológico, Imunocromatografia e Automação (ELISA, CLIA e Western Blot)

Imunologia antiviral aplicada ao diagnóstico laboratorial e dinâmicas cinéticas de soroconversão: 1. Cinética da Resposta Imune Antiviral e Janela Imunológica Diagnóstica: cronologia dos marcadores biológicos após a infecção viral primária: fase pré-sorológica precoce (período de eclipse e viremia aguda no qual apenas o ácido nucleico viral - DNA/RNA ou antígenos estruturais precoces são mensuráveis no sangue periférico antes da resposta adaptativa); início da síntese de anticorpos específicos da classe IgM (marcador de fase aguda primária, com meia-vida curta e declínio gradual em semanas a meses); soroconversão de anticorpos da classe IgG (marcadores de imunidade de memória humoral tardia, com títulos persistentes por anos ou por toda a vida); conceito fundamental de Janela Imunológica (período crítico entre a exposição ao vírus e o momento em que os anticorpos atingem níveis analiticamente detectáveis pelos testes laboratoriais); consequências analíticas: testes sorológicos falso-negativos durante a janela imunológica precoce, exigindo testes moleculares ou pesquisa de antígenos. 2. Teste de Avidez de Anticorpos IgG: fundamento biofísico da maturação de afinidade dos linfócitos B nos centros germinativos após primoinfecção: anticorpos IgG produzidos na fase aguda precoce possuem baixa força de ligação estereoespecífica (baixa avidez) aos epítopos virais, enquanto anticorpos sintetizados após infecção crônica ou pregressa adquirem altíssima avidez (alta afinidade): realização do ensaio com eluição com agente caotrópico (ureia a 6 M ou dietilamina): o reagente rompe ligações fracas de anticorpos de baixa avidez sem desfazer os complexos de alta avidez; cálculo do Índice de Avidez (IA = absorbância com ureia / absorbância sem ureia x 100): índice de baixa avidez (< 40% a 50%) comprova formalmente infecção primária aguda recente contraída nos últimos 3 a 4 meses (mandatório em gestantes para Toxoplasmose, Citomegalovírus e Rubéola), enquanto índice de alta avidez (> 60%) descarta infecção primária aguda gestacional recente, tranquilizando a conduta obstétrica. 3. Metodologias Sorológicas Automatizadas: 1. Ensaio Imunoenzimático (ELISA): métodos indiretos, de captura (especialmente MAC-ELISA para IgM, capturando primeiro as IgM séricas com anticorpo anti-cadeia mu na fase sólida para evitar interferência competitiva por excesso de IgG e fatores reumatoides) e ensaios tipo sanduíche de dupla antígeno; 2. Imunoensaios por Quimioluminescência (CLIA) e Eletroquimioluminescência (ECLIA): automação randômica de alto rendimento empregando micropartículas paramagnéticas revestidas por antígenos recombinantes purificados e conjugados enzimáticos marcados com éster de acridínio ou quelatos de rutênio: a reação química oxidativa gera espécies excitadas que emitem fótons de luz mensurados por tubos fotomultiplicadores de altíssima sensibilidade analítica (unidades relativas de luz - RLU); cálculo automatizado do índice de corte (Cut-off): razão Sinal/Cut-off (S/CO ou Index): valores >= 1,0 definem amostras reagentes/positivas; 3. Testes Rápidos Imunocromatográficos de Fluxo Lateral (PoCT - Point-of-Care Testing): membranas de nitrocelulose com migração por capilaridade; conjugados com nanopartículas de ouro coloidal ou látex; validação obrigatória da Linha de Controle (C) para atestar a migração cromatográfica correta e leitura visual da Linha de Teste (T); fenômeno de prozona em amostras com concentrações massivas de anticorpos; e 4. Testes Confirmatórios Suplementares por Western Blot e Immunoblot Recombinante: proteínas virais nativas ou recombinantes separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e transferidas para membrana de nitrocelulose; incubação com o soro do paciente e revelação com anticorpos secundários conjugados a enzimas cromogênicas; critérios de positividade padronizados internacionalmente (ex.: CDC/OMS para HIV-1 exigindo a presença de no mínimo duas bandas principais de envelope gp120/gp160 ou gp41 e bandas de gag p24 ou pol p66/p51 para laudo reagente definitivo; resolução de padrões indeterminados com ausência de bandas ou bandas isoladas).

10h
4

Célula 04: Hepatites Virais: HBV, HCV, HAV, HDV e HEV: Marcadores, Carga Viral e Algoritmos

Fisiopatologia, dinâmica sorológica e rotina diagnóstica integrada das hepatites virais conforme diretrizes do Ministério da Saúde do Brasil e da OMS: 1. Vírus da Hepatite B (HBV - família Hepadnaviridae, vírus de DNA de fita dupla parcial com transcriptase reversa): interpretação clínica da bateria de 6 marcadores sorológicos e moleculares: 1. HBsAg (Antígeno de Superfície do HBV / Antígeno Austrália): primeiro marcador sorológico mensurável no soro (surge de 1 a 10 semanas pós-infecção), indicando presença de infecção ativa pelo HBV (aguda ou crônica); sua persistência por período superior a 6 meses define formalmente a cronicidade da infecção; 2. Anti-HBs: anticorpo protetor neutralizante contra o HBsAg: surge após a resolução e depuração espontânea da infecção aguda ou após vacinação com antígeno recombinante; confere imunidade clínica duradoura quando presente em títulos iguais ou superiores a 10 mUI/mL; 3. Anti-HBc Total: anticorpos contra o antígeno do capsídeo viral (core): marcador definitivo de contato biológico prévio ou atual com o vírus selvagem (NUNCA é induzido pela vacina recombinante contra hepatite B, permitindo diferenciar um indivíduo vacinado - Anti-HBs isolado positivo - de um indivíduo com imunidade natural curada - Anti-HBs positivo acompanhado de Anti-HBc Total positivo); 4. Anti-HBc IgM: marcador sorológico exclusivo de infecção aguda recente pelo HBV (ou de reativação aguda grave em portadores crônicos), presente inclusive na 'janela imunológica de core' (período transitório em que o HBsAg desapareceu, mas o Anti-HBs protetor ainda não se tornou detectável); 5. HBeAg (Antígeno solúvel 'e'): marcador de intensa replicação viral intra-hepática ativa e elevada infectividade/transmissibilidade; 6. Anti-HBe: anticorpo que surge na soroconversão e desaparecimento do HBeAg, indicando transição para fase de baixa replicação viral e melhora do prognóstico clínico (exceto nos casos de cepas variantes mutantes na região pré-core ou no promotor basal do core - BCP, que não produzem HBeAg mas mantêm replicação viral ativa e agressiva); e 7. HBV-DNA quantitativo por PCR em tempo real (Carga Viral do HBV em UI/mL): marcador molecular mandatória para indicação de terapia antiviral com análogos de nucleosídeos (Tenofovir, Entecavir), monitoramento da resposta virológica e rastreamento da Hepatite B Oculta (HBsAg indetectável no soro, mas com HBV-DNA detectável). 2. Vírus da Hepatite C (HCV - família Flaviviridae, gênero Hepacivirus, vírus de RNA fita simples positivo envelopado com acentuada variabilidade genética em genótipos 1 a 6 e quasispécies): algoritmo diagnóstico oficial: triagem sorológica inicial por imunoensaio de 4ª geração para detecção de anticorpos Anti-HCV totais -> em caso de resultado reagente, execução mandatória e reflexa do teste molecular quantitativo de HCV-RNA por RT-qPCR em tempo real: se o HCV-RNA for detectável, confirma-se o diagnóstico de Infecção Ativa em Curso (aguda ou crônica ativa), indicando tratamento com Antivirais de Ação Direta (DAAs pangenotípicos como sofosbuvir/velpatasvir); se o HCV-RNA for indetectável, diagnostica-se Infecção Passada Resolvida (cura espontânea em cerca de 15% a 25% dos casos ou cura farmacológica prévia por DAAs); monitoramento da cura virológica: avaliação da Resposta Virológica Sustentada (RVS): ausência completa e indetectabilidade de HCV-RNA plasmático 12 ou 24 semanas após o término do regime antiviral (RVS12 ou RVS24), consolidando a cura biológica definitiva; genotipagem do HCV por sequenciamento de Sanger ou RT-PCR reversa para mapeamento de mutações de resistência aos DAAs. 3. Vírus da Hepatite Delta (HDV): vírus de RNA satélite defectivo que requer a presença concomitante do envelope de HBsAg do HBV para sua montagem estrutural, infectividade e transmissão: infecção mista por Coinfecção Simultânea aguda (adquirida juntamente com o HBV) versus Superinfecção por HDV em indivíduo que já é portador crônico de HBsAg (evolução fulminante e rápida progressão para cirrose); diagnóstico por Anti-HDV total e HDV-RNA por RT-qPCR; 4. Vírus da Hepatite A (HAV) e Hepatite E (HEV): vírus nus de transmissão fecal-oral entérica associados a surtos e alimentos contaminados: diagnóstico sorológico de fase aguda por Anti-HAV IgM e Anti-HEV IgM.

10h
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Célula 05: Retrovírus Humanos (HIV-1, HIV-2 e HTLV-1/2) e Herpesvírus Latentes

Biologia dos retrovírus oncogênicos e imunossupressores e virologia médica da família Herpesviridae: 1. Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV-1 e HIV-2 - família Retroviridae, gênero Lentivirus): estrutura macromolecular do virion esférico envelopado contendo duas cópias idênticas de (+)ssRNA; enzimas virais essenciais codificadas pelo gene pol: Transcriptase Reversa (sintetiza DNA complementar a partir do molde de RNA viral), Integrase (insere o DNA proviral no genoma da célula hospedeira humana, estabelecendo latência genômica vitalícia) e Protease (cliva as poliproteínas Gag e Gag-Pol em proteínas funcionais durante a maturação do virion); glicoproteínas de envelope codificadas pelo gene env: gp120 (medeia a fixação de alta afinidade à molécula CD4 da superfície de linfócitos T auxiliares, monócitos e macrófagos, e aos correceptores de quimiocinas CCR5 em cepas R5 macrófago-trópicas ou CXCR4 em cepas X4 linfotrópicas) e gp41 (medeia a fusão do envelope viral com a membrana celular); proteínas estruturais codificadas pelo gene gag: p24 (principal antígeno proteico do capsídeo icosaédrico) e p17 (matriz interna). Algoritmo Oficial de Diagnóstico Laboratorial do HIV (Portaria do Ministério da Saúde do Brasil / OMS): Fluxograma diagnóstico padrão: 1. Teste Inicial (T1): Imunoensaio de 4ª Geração (ensaio automatizado por CLIA ou ELISA que detecta simultaneamente o antígeno viral p24 precoce e os anticorpos Anti-HIV-1 e Anti-HIV-2 no soro ou plasma): se T1 for Não Reagente -> laudo negativo definitivo; se T1 for Reagente -> realização imediata de Teste Confirmatório Molecular ou Imunológico (T2): quantificação plasmática de Carga Viral de HIV-1 RNA por RT-qPCR em tempo real ou Imunoblot rápido discriminatório: se T2 for detectável/positivo -> laudo reagente confirmatório de infecção por HIV; se T2 for indetectável em amostra com T1 reagente -> investigação de infecção aguda muito recente em fase inicial de soroconversão com antígeno p24 isolado ou resultado falso-positivo em T1, procedendo-se à recoleta em 30 dias; monitoramento imunológico e virológico de pacientes sob Terapia Antirretroviral (TARV): quantificação da Carga Viral de HIV-1 plasmática (meta clínica de indetectabilidade com Carga Viral < 50 ou < 20 cópias/mL) e Imunofenotipagem por Citometria de Fluxo para contagem absoluta e percentual de Linfócitos T auxiliares CD4+ e citotóxicos CD8+ com cálculo da Razão CD4/CD8; Testes de Genotipagem de Resistência Viral aos Antirretrovirais por sequenciamento de Sanger ou NGS para detecção de mutações genéticas nos genes da transcriptase reversa (ex.: mutação M184V), protease e integrase antes e durante falhas virológicas da TARV. 2. Vírus Linfotrópicos de Células T Humanas (HTLV-1 e HTLV-2 - gênero Deltaretrovirus): retrovírus associados à etiologia da Paraparesia Espástica Tropical / Mielopatia Associada ao HTLV (PET/MAH) e à Leucemia/Linfoma de Células T do Adulto (ATLL); transmissão por via sexual, aleitamento materno e sangue; diagnóstico de triagem por imunoensaio e confirmação mandatória por Western Blot (discriminação entre HTLV-1 e HTLV-2) ou PCR em células mononucleares de sangue periférico (PBMC). 3. Família Herpesviridae: vírus de DNA de fita dupla envelopados de genoma volumoso que compartilham a característica patognomônica de estabelecer infecções latentes vitalícias no hospedeiro com reativações periódicas: Alfaherpesvírus: HSV-1 (herpes orofacial e encefalite herpética temporal necrotizante com alta mortalidade), HSV-2 (herpes genital ulcerado recorrente e meningite de Mollaret) e Vírus Varicela-Zóster (VZV / HHV-3: catapora na infecção primária com exantema vesicular polimórfico pruriginoso e herpes-zóster / 'cobreiro' na reativação em dermátomos por latência em gânglios sensitivos dorsais); diagnóstico por RT-qPCR multiplex em líquor e raspado de vesículas; Betaherpesvírus: Citomegalovírus Humano (CMV / HHV-5: principal causa de infecção congênita viral com sequelas neurológicas e surdez neurossensorial, além de retinite, esofagite e pneumonia intersticial em imunodeprimidos e transplantados): monitoramento cinético de Carga Viral de CMV-DNA quantitativo em plasma por RT-qPCR para orientação de terapia preemptiva antiviral com ganciclovir em transplantados de medula óssea e órgãos sólidos; Herpesvírus Humanos 6 e 7 (HHV-6 e HHV-7: agentes do exantema súbito infantil / roséola); e Gamaherpesvírus: Vírus Epstein-Barr (EBV / HHV-4: agente etiológico da Mononucleose Infecciosa 'doença do beijo', linfoma de Burkitt e carcinoma nasofaríngeo): perfil sorológico diferencial (pesquisa de anticorpos heterófilos, Anti-VCA IgM de fase aguda, Anti-VCA IgG e Anti-EBNA indicativo de infecção passada/latente) e HHV-8 (associado ao Sarcoma de Kaposi).

10h
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Célula 06: Arboviroses (Dengue, Zika, Chikungunya), Vírus Respiratórios e Emergentes

Epidemiologia diagnóstica, vigilância laboratorial e investigação molecular de arboviroses urbanas, vírus respiratórios epidêmicos/pandêmicos e patógenos virais emergentes: 1. Arboviroses transmitidas por artrópodes vetores (Aedes aegypti e Aedes albopictus): 1. Vírus da Dengue (DENV-1, DENV-2, DENV-3, DENV-4 - família Flaviviridae): dinâmica temporal diagnóstica escalonada rigorosamente pelos dias de evolução dos sintomas clínicos: Fase Aguda Virêmica Precoce (do 1º ao 5º dia de febre): métodos diagnósticos de escolha: detecção do antígeno solúvel não estrutural NS1 por ELISA de captura ou imunocromatografia de alta sensibilidade (o antígeno NS1 é secretado abundantemente pelos monócitos e hepatócitos infectados) e RT-qPCR em tempo real para identificação e sorotipagem do RNA viral de DENV; Fase Imune Tardia (a partir do 6º dia pós-início da febre): os níveis de viremia e antígeno NS1 declinam vertiginosamente, tornando mandatório o diagnóstico sorológico pela pesquisa de anticorpos Anti-Dengue IgM específicos por ELISA de captura (MAC-ELISA) e titulação de Anti-Dengue IgG pareada (uma elevação de 4 vezes nos títulos de IgG entre a fase aguda e convalescente confirma infecção secundária com risco acentuado de Dengue Grave / extravasamento plasmático e choque hemorrágico); marcadores hematológicos e metabólicos de alarme laboratorial crítico: hemoconcentração abrupta (elevação do hematócrito acima de 20% do basal indicando choque por fuga capilar), trombocitopenia acentuada (< 100.000 plaquetas/microL) e elevação precoce de aminotransferases (AST/ALT); 2. Vírus Chikungunya (CHIKV - família Togaviridae, gênero Alphavirus): apresentação clínica com poliartrite e artralgia periférica simétrica bilateral intensamente incapacitante: diagnóstico por RT-qPCR em tempo real (sensibilidade máxima do 1º ao 8º dia de sintomas) e pesquisa de anticorpos específicos Anti-CHIKV IgM por ELISA a partir do 8º dia pós-sintomas; 3. Vírus Zika (ZIKV - família Flaviviridae): exantema maculopapular pruriginoso, febre baixa e risco severo de Síndrome Congênita do Zika com microcefalia fetal, atrofia cerebral e calcificações do SNC, além de Síndrome de Guillain-Barré em adultos: diagnóstico molecular por RT-qPCR em tempo real em amostras de sangue (1º ao 5º dia) e urina (onde a excreção viral e a detecção de ZIKV-RNA prolongam-se por até 15 a 20 dias pós-infecção); alerta sorológico de reação cruzada intensa de anticorpos IgM/IgG com outros flavivírus (Dengue e Febre Amarela), exigindo confirmação por RT-qPCR ou Teste de Neutralização por Redução de Placas (PRNT); 4. Vírus da Febre Amarela (YFV - Flaviviridae): arbovirose hemorrágica silvestre (vetores Haemagogus e Sabethes) e urbana com necrose hepática maciça e insuficiência renal: diagnóstico por RT-qPCR de YFV-RNA e sorologia MAC-ELISA. 2. Vírus Respiratórios Sazonais e Pandêmicos: 1. Vírus Influenza A (H1N1, H3N2) e Influenza B (família Orthomyxoviridae): vírus envelopados com genoma de RNA segmentado em 8 fitas: mecanismos de evolução antigênica: Drift Antigênico (mutações pontuais anuais nos genes das espículas de hemaglutinina - HA e neuraminidase - NA, exigindo reformulação anual das vacinas) versus Shift Antigênico (reassortimento genômico completo entre cepas humanas, suínas e aviárias, gerando novos subtipos pandêmicos com ausência de imunidade populacional prévia); 2. Vírus Sincicial Respiratório (VSR - Pneumoviridae): principal causa de bronquiolite e pneumonia viral em lactentes; 3. Coronavírus Humanos e SARS-CoV-2 (COVID-19 - gênero Betacoronavirus): diagnóstico padrão-ouro por RT-qPCR multiplex em tempo real para múltiplos alvos genômicos (genes da polimerase dependente de RNA - RdRp, envelope - E e nucleocapsídeo - N) e testes rápidos de antígeno para proteína N; vigilância genômica de Variantes de Preocupação (VOCs) por sequenciamento de nova geração (NGS). 3. Vírus Emergentes e Reemergentes de Importância Sanitária Global: Mpox (família Poxviridae, gênero Orthopoxvirus, vírus de DNA de fita dupla envelopado): transmissão por contato cutâneo direto com lesões vesiculares e crostas: diagnóstico molecular por qPCR em tempo real em swab de lesões ativas sob biossegurança NB-2; Vírus Oropouche (OROV - família Peribunyaviridae): arbovirose reemergente no Brasil transmitida pelo mosquito-pólvora ou maruim (Culicoides paraensis), diagnosticada por RT-qPCR; Febres Hemorrágicas Virais por Filovírus (Vírus Ebola e Marburg) manuseados sob contenção máxima de Biossegurança Nível 4 (NB-4); Hantavírus (Síndrome Cardiopulmonar por Hantavírus transmitida por inalação de aerossóis secos de urina e excretas de roedores silvestres); biossegurança laboratorial, descarte de resíduos infectantes e notificação compulsória imediata no Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) conforme as normas da RDC ANVISA nº 786/2023 e NBR ISO 15189.

10h