Microaula em Método CELULA • Prévia Aberta

<p>Princípios fundamentais do cultivo e isolamento bacteriano primário: técnicas assépticas de semeadura na bancada laboratorial com uso de bico de Bunsen ou cabine de segurança biológica; técnica de semeadura por esgotamento em estrias com alça bacteriológica calibrada em quatro quadrantes, garantindo a diluição mecânica sucessiva da carga bacteriana até a obtenção de colônias isoladas puras (UFCs - Unidades Formadoras de Colônias derivadas de uma única célula progenitora); semeadura quantitativa em uroculturas com alça calibrada de 1 microlitro (0,001 mL) ou 10 microlitros (0,01 mL) para contagem de colônias por mL de urina e definição de bacteriúria significativa (&gt;= 10^5 UFC/mL). Classificação funcional e formulação bioquímica dos meios de cultura: 1. Meios Basais e Meios Enriquecidos: Ágar Sangue de carneiro a 5% (meio enriquecido universal não seletivo com base de ágar triptona de soja ou infusão de coração-cérebro suplementada com sangue desfibrinado de carneiro; avaliação dos padrões de hemólise bacteriana: alfa-hemólise com lise parcial de eritrócitos e formação de halo esverdeado ao redor da colônia por redução de hemoglobina em metemoglobina, beta-hemólise com lise completa dos glóbulos vermelhos com formação de halo totalmente transparente e incolor, e gama-hemólise indicando ausência de hemólise); Ágar Chocolate (preparado por adição de sangue de carneiro ao ágar aquecido a 80°C promovendo a lise térmica dos eritrócitos com liberação de hemina / fator X e nicotinamida adenina dinucleotídeo / NAD / fator V, essencial para o cultivo de bactérias fastidiosas exigentes como Haemophilus influenzae e Neisseria gonorrhoeae); 2. Meios Seletivos e Diferenciais: Ágar MacConkey: o meio de triagem padrão para bacilos Gram-negativos; seletivo pela incorporação de sais biliares e corante cristal violeta que inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas; diferencial pela inclusão do carboidrato lactose e do indicador de pH vermelho neutro: bactérias fermentadoras de lactose (Lactose-positivas como Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae) produzem ácidos orgânicos que reduzem o pH abaixo de 6,8, precipitando os sais biliares e tornando as colônias e o meio circundante em tom rosa-choque ou magenta intenso; bactérias não fermentadoras de lactose (Lactose-negativas como Salmonella, Shigella, Proteus e Pseudomonas) utilizam peptona gerando subprodutos alcalinos com pH elevado, desenvolvendo colônias translúcidas incolores; Ágar Eosina Azul de Metileno (EMB / Teague): diferencia fermentadores de lactose com formação de colônias negras com reflexo verde metálico característico em Escherichia coli; Ágar Sal Manitol (Chapman): meio com alta concentração de cloreto de sódio (7,5% NaCl) seletivo para o gênero halotolerante Staphylococcus, contendo manitol e indicador vermelho de fenol (Staphylococcus aureus fermenta o manitol virando o meio de vermelho para amarelo brilhante; Staphylococcus epidermidis cresce sem fermentar manitol, mantendo o meio vermelho); Ágar CLED (Cistina-Lactose-Eletrólito-Deficiente): meio deficiente em eletrólitos para urocultura que impede o fenômeno indesejado de espalhamento em onda (swarming) de Proteus mirabilis; Ágar Salmonella-Shigella (SS) e Ágar Hektoen com tiossulfato de sódio e citrato férrico para evidenciação de sulfeto de hidrogênio (H2S com centro negro nas colônias de Salmonella); e Ágar TCBS (Tiossulfato-Citrato-Bile-Sacarose) seletivo para Vibrio cholerae. Atmosferas e condições de incubação microbiana: controle termostático a 35-37°C; 1. Aerobiose: incubação em estufa bacteriológica convencional sob atmosfera ambiente; 2. Capnofilia: atmosfera enriquecida com 5% a 10% de CO2 obtida por incubadoras gasosas com injeção de CO2 ou sistema de vela em jarra hermética, necessária para o crescimento vigoroso de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae e Neisseria meningitidis; 3. Microaerofilia: atmosfera contendo teor reduzido de oxigênio (5% O2, 10% CO2 e 85% N2) obtida por envelopes geradores de gás específicos para cultivo de Campylobacter jejuni (incubado a 42°C) e Helicobacter pylori; e 4. Anaerobiose Estrita: sistemas herméticos de jarras de anaerobiose ou câmara de fluxo contínuo com envelopes químicos geradores de hidrogênio e CO2 catalisados por paládio com indicador redox de azul de metileno ou resazurina (tiras indicadoras tornam-se brancas em ausência total de O2), fundamental para o isolamento de anaeróbios patogênicos como Clostridioides difficile, Clostridium tetani, Clostridium perfringens e Bacteroides fragilis.</p>

Princípios fundamentais do cultivo e isolamento bacteriano primário: técnicas assépticas de semeadura na bancada laboratorial com uso de bico de Bunsen ou cabine de segurança biológica; técnica de semeadura por esgotamento em estrias com alça bacteriológica calibrada em quatro quadrantes, garantindo a diluição mecânica sucessiva da carga bacteriana até a obtenção de colônias isoladas puras (UFCs - Unidades Formadoras de Colônias derivadas de uma única célula progenitora); semeadura quantitativa em uroculturas com alça calibrada de 1 microlitro (0,001 mL) ou 10 microlitros (0,01 mL) para contagem de colônias por mL de urina e definição de bacteriúria significativa (>= 10^5 UFC/mL). Classificação funcional e formulação bioquímica dos meios de cultura: 1. Meios Basais e Meios Enriquecidos: Ágar Sangue de carneiro a 5% (meio enriquecido universal não seletivo com base de ágar triptona de soja ou infusão de coração-cérebro suplementada com sangue desfibrinado de carneiro; avaliação do...