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<p>Uma equipe de pesquisadores em diagnóstico molecular de um instituto de biotecnologia recebe amostras de saliva de pacientes com carcinoma epidermoide de orofaringe para isolamento de biomarcadores exossomais. O técnico executa apenas uma centrifugação comum a 10.000 x g e tenta analisar o sobrenadante por espectrofotometria, detectando níveis altíssimos de contaminação por amilase e mucina salivar que saturam o espectrômetro e inviabilizam a visualização de vesículas. O biólogo oral e pesquisador sênior assume a coordenação analítica: explica que as vesículas extracelulares pequenas (exossomos) possuem diâmetro de 30 a 150 nm e densidade de flotação característica (1,13 a 1,19 g/mL em gradiente de sacarose), exigindo métodos de separação de alta resolução para remoção de proteínas solúveis salivares. A equipe implementa o protocolo de Cromatografia de Exclusão por Tamanho (SEC) associado à validação por Nanoparticle Tracking Analysis (NTA) e Western Blotting para as tetraspaninas CD9, CD63 e CD81, obtendo suspensões puras e monodispersas de exossomos com concentração superior a 10^10 partículas/mL.</p>

As Vesículas Extracelulares (EVs / Extracellular Vesicles) representam uma sofisticada rede de comunicação intercelular parácrina e sistêmica conservada ao longo da evolução biológica. Na saliva humana, essas nanoestruturas funcionam como transportadores biológicos protegidos que conduzem um rico inventário de ácidos nucleicos, lipídios e proteínas regulatórias originados tanto dos tecidos epiteliais orais locais quanto de órgãos distantes.

As EVs salivares dividem-se em três classes biofísicas distintas de acordo com seu mecanismo de formação e diâmetro:

• Corpos Apoptóticos (1.000 a 5.000 nm): fragmentos celulares originados do blebbing da membrana de células em morte celular programada, contendo restos organelares e cromatina nuclear condensada.
• Microvesículas / Ectossomos (100 a 1.000 nm): vesículas formadas pelo brotamento direto e evaginação focal da membrana plasmática celular sob ativação de flipases, ...