Microaula em Método CELULA • Prévia Aberta

<p>Físico-química da interação antígeno-anticorpo: forças intermoleculares não covalentes (pontes de hidrogênio, interações eletrostáticas, forças de Van der Waals e interações hidrofóbicas); afinidade termodinâmica monovalente (constante de associação Ka) versus avidez funcional multivalente (força de ligação combinada de imunoglobulinas polivalentes, especialmente pentâmeros de IgM com 10 sítios de ligação e dâmeros de IgA); especificidade analítica e reatividade cruzada entre epítopos estruturalmente homólogos; e a curva de precipitação quantitativa de Heidelberger-Kendall: zona de excesso de anticorpo (fenômeno de pró-zona / Prozone Effect), zona de equivalência ideal com formação de imunocomplexos insolúveis em rede tridimensional, e zona de excesso de antígeno (efeito pós-zona); impacto do efeito pró-zona em testes de aglutinação e imunoensaios, gerando resultados falso-negativos em amostras com títulos extremamente elevados de anticorpos, e protocolos obrigatórios de diluição seriada da amostra para confirmação diagnóstica. Métodos de aglutinação e precipitação: aglutinação direta de hemácias (tipagem sanguínea ABO/Rh e teste de Coombs direto/indireto); aglutinação indireta ou passiva com partículas carreadoras de látex (pesquisa de fator reumatoide e proteína C reativa semiquantitativa); inibição da hemaglutinação; técnicas ópticas de precipitação em meio líquido: nefelometria (mensuração da dispersão da luz por imunocomplexos em ângulo de 70 a 90 graus, padrão-ouro para quantificação de imunoglobulinas IgG, IgA, IgM, frações de complemento C3/C4 e cadeias leves livres) versus turbidimetria (mensuração da redução da intensidade do feixe de luz transmitido a 180 graus). Métodos marcados e imunoensaios modernos: Enzimaimunoensaio (ELISA / EIA): formatos direto, indireto (detecção de anticorpos séricos), sanduíche (detecção de antígenos multivalentes com anticorpo de captura e de detecção) e competitivo (quantificação de pequenas moléculas e hormônios); enzimas marcadoras (peroxidase de rábano - HRP com substrato cromógeno TMB gerando coloração azul convertida em amarela por parada ácida, e fosfatase alcalina com pNPP), cálculo de densidade óptica (DO), ponto de corte (Cut-off) e índice de reatividade; Imunofluorescência direta (IFD com anticorpo marcado com isotiocianato de fluoresceína - FITC em biópsias teciduais de rim e pele) e Imunofluorescência indireta (IFI em substratos celulares e cortes histológicos congelados com leitura em microscopia de epifluorescência); Quimioluminescência (CLIA com ésteres de acridina ou isoluminol ativados por peróxido de hidrogênio gerando emissão de fótons de luz) e Eletroquimioluminescência (ECLIA com quelato de rutênio excitado eletricamente em microesferas magnéticas), demonstrando limites de detecção analítica ultrassensíveis em picogramas/fentogramas por mL e ampla faixa de linearidade; Testes rápidos imunocromatográficos (Lateral Flow Immunoassay): fluxo capilar em membrana de nitrocelulose com nanopartículas de ouro coloidal ou látex colorido para triagem no ponto de cuidado (Point-of-Care Testing - POCT). Citometria de Fluxo e Imunofenotipagem: princípios biofísicos da focalização hidrodinâmica de suspensões celulares em fluxo laminar contínuo; excitação por múltiplos lasers (azul 488 nm, vermelho 633 nm e violeta 405 nm); dispersão frontal da luz (Forward Scatter - FSC, proporcional ao tamanho celular relativo) e dispersão lateral (Side Scatter - SSC, proporcional à granularidade e complexidade interna); anticorpos monoclonais conjugados a fluorocromos com emissão espectral distinta (FITC, PE, PerCP, APC); imunofenotipagem de populações e subpopulações leucocitárias (painel de linfócitos T CD3+, T CD4+, T CD8+, linfócitos B CD19+/CD20+, e células NK CD16+/CD56+); contagem absoluta e percentual com uso de microesferas calibradas (TrueCount) para monitoramento de imunodeficiências e leucemias; e análise multiparamétrica por gráficos de pontos (dot plots) e estratégia de gates de seleção.</p>

Físico-química da interação antígeno-anticorpo: forças intermoleculares não covalentes (pontes de hidrogênio, interações eletrostáticas, forças de Van der Waals e interações hidrofóbicas); afinidade termodinâmica monovalente (constante de associação Ka) versus avidez funcional multivalente (força de ligação combinada de imunoglobulinas polivalentes, especialmente pentâmeros de IgM com 10 sítios de ligação e dâmeros de IgA); especificidade analítica e reatividade cruzada entre epítopos estruturalmente homólogos; e a curva de precipitação quantitativa de Heidelberger-Kendall: zona de excesso de anticorpo (fenômeno de pró-zona / Prozone Effect), zona de equivalência ideal com formação de imunocomplexos insolúveis em rede tridimensional, e zona de excesso de antígeno (efeito pós-zona); impacto do efeito pró-zona em testes de aglutinação e imunoensaios, gerando resultados falso-negativos em amostras com títulos extremamente elevados de anticorpos, e protocolos obrigatórios de diluição se...