Microaula em Método CELULA • Prévia Aberta

<p>Fronteiras analíticas contemporâneas no laboratório de parasitologia médica: 1. Pesquisa de Coproantígenos Fecais por Imunoensaios: superação das limitações diagnósticas intrínsecas da microscopia óptica convencional decorrentes da eliminação intermitente de cistos, oocistos e ovos nas fezes; ensaios imunoenzimáticos (ELISA sanduíche em microplacas) e ensaios imunocromatográficos de fluxo lateral (testes rápidos POCT) para detecção direta de antígenos solúveis de superfície e toxinas parasitárias em amostras fecais frescas ou conservadas: coproantígenos de Giardia duodenalis (antígeno de parede cística de 65 kDa - GSA-65), Cryptosporidium spp. e do complexo Entamoeba histolytica; e kits combinados multiplex de alta sensibilidade e especificidade (&gt; 95%) com detecção simultânea dos três enteropatógenos em fezes diarreicas, dispensando a presença física de formas intactas íntegras observáveis ao microscópio. 2. Diagnóstico Molecular Aplicado à Parasitologia Clínica: Reação em Cadeia da Polimerase convencional e PCR em Tempo Real (qPCR quantitativo): princípios de desenho de primers e sondas fluorescentes TaqMan voltados para regiões conservadas do DNA ribossômico (genes 18S rDNA, ITS-1 e ITS-2) e genes de cópia única de protozoários e helmintos; principais aplicações diagnósticas de alta precisão: diferenciação molecular definitiva entre Entamoeba histolytica (genes da lectina Gal/GalNAc) e Entamoeba dispar; detecção ultrassensível e diferenciação de espécies de Plasmodium (P. falciparum, P. vivax, P. malariae) em casos de malária com parasitemia submimicroscópica e infecções mistas; genotipagem de cepas de Toxoplasma gondii e espécies de Leishmania (discriminação entre L. braziliensis e L. amazonensis para prognóstico de acometimento mucoso); desafios pré-analíticos e analíticos da extração de DNA parasitário a partir de fezes humanas: presença maciça de inibidores potentes da DNA polimerase na matriz fecal (ácidos biliares, bilirrubina, polissacarídeos complexos de dieta vegetal, lipídios e excesso de DNA bacteriano da microbiota intestinal); e protocolos especializados de lise mecânica rigorosa por esferas de zircônio (Bead Beating para rompimento de paredes espessas de cistos e oocistos), purificação em colunas de sílica ou nanopartículas magnéticas com agentes quelantes (PVPP e resinas de troca iônica), e uso obrigatório de controle interno de amplificação exógeno em cada reação para validação de ausência de inibição analítica de PCR. 3. Gestão da Qualidade Total e Boas Práticas em Parasitologia Laboratorial conforme a ABNT NBR ISO 15189:2022 e RDC ANVISA nº 786/2023: Fase Pré-Analítica: POP de orientação ao paciente com coleta seriada correta, armazenamento e proporção adequada entre fezes e fixador (1 parte de fezes para 3 partes de conservante); critérios de aceitação e rejeição de amostras coprológicas (recipientes vazando, contaminação por urina, amostras ressecadas sem conservante ou tempo de transporte inadequado para trofozoítos); Fase Analítica: microscopia óptica com manutenção preventiva periódica, alinhamento de iluminação de Köhler, e calibração periódica do retículo micrométrico ocular: calibração com lâmina padrão micrométrica de estágio (micrômetro de platina graduado em divisões de 10 e 100 micrômetros) calculando o fator de calibração para cada objetiva (10x, 40x e 100x de imersão) para medição precisa do diâmetro de cistos, oocistos e ovos em micrômetros (essencial para diferenciar cistos de E. histolytica de 12 um de cistos de E. hartmanni &lt; 10 um); constituição e manutenção de parasitoteca física de referência e atlas digital interno com lâminas positivas e negativas arquivadas para treinamento continuado e Controle Interno da Qualidade (CQI); participação mandatória em programas de Ensaio de Proficiência / Controle Externo da Qualidade (CQE / PNCQ e Controllab) com análise de concordância interobservador pelo índice Kappa; e Fase Pós-Analítica: padronização da nomenclatura taxonômica científica (grafia em itálico com gênero maiúsculo e espécie minúscula), semiquantificação de formas parasitárias por cruzes (+ a ++++) ou número por campo, e laudos integrados de conformidade diagnóstica.</p>

Fronteiras analíticas contemporâneas no laboratório de parasitologia médica: 1. Pesquisa de Coproantígenos Fecais por Imunoensaios: superação das limitações diagnósticas intrínsecas da microscopia óptica convencional decorrentes da eliminação intermitente de cistos, oocistos e ovos nas fezes; ensaios imunoenzimáticos (ELISA sanduíche em microplacas) e ensaios imunocromatográficos de fluxo lateral (testes rápidos POCT) para detecção direta de antígenos solúveis de superfície e toxinas parasitárias em amostras fecais frescas ou conservadas: coproantígenos de Giardia duodenalis (antígeno de parede cística de 65 kDa - GSA-65), Cryptosporidium spp. e do complexo Entamoeba histolytica; e kits combinados multiplex de alta sensibilidade e especificidade (> 95%) com detecção simultânea dos três enteropatógenos em fezes diarreicas, dispensando a presença física de formas intactas íntegras observáveis ao microscópio. 2. Diagnóstico Molecular Aplicado à Parasitologia Clínica: Reação em Cadei...