Microaula em Método CELULA • Prévia Aberta

<p>Princípios fundamentais da virologia médica e organização físico-química dos agentes virais: natureza acelular dos vírus como parasitas intracelulares obrigatórios estritos desprovidos de metabolismo autônomo e de maquinário ribossomal de síntese proteica; arquitetura macromolecular do virion maduro: genoma viral constituído exclusivamente por um único tipo de ácido nucleico (DNA ou RNA, de fita simples ou dupla, linear, circular ou segmentado); a Classificação de Baltimore como sistema taxonômico padrão baseado no mecanismo de biossíntese de RNA mensageiro (mRNA): Classe I (vírus de DNA fita dupla - dsDNA, ex.: Herpesviridae, Adenoviridae e Poxviridae); Classe II (vírus de DNA fita simples - ssDNA, ex.: Parvoviridae / Parvovírus B19); Classe III (vírus de RNA fita dupla - dsRNA, ex.: Reoviridae / Rotavírus); Classe IV (vírus de RNA fita simples senso positivo - (+)ssRNA cujo genoma atua diretamente como mRNA traduzível pelos ribossomos do hospedeiro, ex.: Flaviviridae / Dengue e Coronaviridae / SARS-CoV-2); Classe V (vírus de RNA fita simples senso negativo - (-)ssRNA que transportam obrigatoriamente a enzima RNA polimerase dependente de RNA no virion para sintetizar a fita positiva complementar, ex.: Orthomyxoviridae / Influenza e Rhabdoviridae / Raiva); Classe VI (retrovírus de RNA fita simples com intermediário de DNA catalisado pela enzima viral transcriptase reversa, ex.: Retroviridae / HIV-1 e HTLV); e Classe VII (vírus de DNA fita dupla com transcriptase reversa e intermediário de RNA pré-genômico, ex.: Hepadnaviridae / Hepatite B). Estrutura do capsídeo proteico protetor formado por subunidades proteicas denominadas capsômeros: simetria icosaédrica (poliedro regular de 20 faces triangulares equiláteras e 12 vértices), simetria helicoidal (capsômeros dispostos em espiral cilíndrica envolvendo o ácido nucleico) e simetria complexa; vírus nus (capsídeo exposto diretamente ao ambiente, altamente resistentes à dessecação, solventes lipídicos, detergentes e pH ácido estomacal, transmitidos frequentemente por via fecal-oral, ex.: Enterovírus, Norovírus e HAV) versus vírus envelopados (capsídeo circundado por bicamada lipídica originada de membranas celulares do hospedeiro durante o brotamento, contendo glicoproteínas virais inseridas, extremamente lábeis ao calor, éter e dessecação, transmitidos por gotículas respiratórias, sangue ou contato íntimo sexual, ex.: HIV, Influenza, Herpes e SARS-CoV-2); papel fundamental das espículas glicoprotéicas (spikes): proteínas de fixação viral que se ligam com alta especificidade estereoespecífica a receptores e correceptores celulares da membrana plasmática da célula hospedeira (tropismo tecidual), mediando a fusão de membranas ou a penetração celular. Etapas sequenciais do ciclo replicativo viral: 1. Adsorção / fixação; 2. Penetração (endocitose mediada por receptor ou fusão direta do envelope com a membrana celular); 3. Desnudamento / liberação do genoma no citoplasma ou núcleo; 4. Expressão gênica precoce e replicação do genoma; 5. Síntese e clivagem proteolítica de poliproteínas por proteases virais; 6. Morfogênese e montagem dos novos capsídeos; e 7. Liberação (por brotamento na membrana plasmática ou lise celular com morte do hospedeiro). Boas práticas na fase pré-analítica de espécimes virológicos: 1. Coleta de swab respiratório (nasofaringe e orofaringe): utilização mandatória e exclusiva de swabs estéreis sintéticos de haste plástica flexível com ponta de dacron, rayon ou poliéster (alerta rigoroso de contraindicação analítica: swabs de algodão comum e hastes de madeira são formalmente proibidos porque contêm fibras de celulose que sequestram ácidos nucleicos, resíduos de formaldeído e substâncias quelantes inibidoras da enzima Taq polimerase em ensaios de PCR); 2. Meio de Transporte Viral (VTM / UTM): solução salina balanceada tamponada isotônica (pH 7,2 a 7,4) contendo albumina bovina ou gelatina como estabilizadores proteicos e coquetel de antimicrobianos (gentamicina, anfotericina B) para inibir o sobrecrescimento de bactérias e fungos contaminantes da flora comensal; 3. Conservação e cadeia de frio analítica: transporte refrigerado imediato entre +2°C e +8°C por no máximo 48 a 72 horas pós-coleta; para períodos superiores de armazenamento ou transporte interinstitucional, as amostras de RNA viral devem ser obrigatoriamente congeladas a -80°C (ou em gelo seco a -70°C), evitando-se ciclos repetidos de congelamento e descongelamento que fragmentam o ácido nucleico; 4. Coleta de sangue para virologia molecular e sorologia: punção a vácuo com anticoagulante EDTA (tubo tampa roxa) para obtenção de plasma rico em virions íntegros (contraindicação absoluta de heparina / tubo tampa verde, pois a heparina é uma molécula polianiônica que mimetiza o DNA e inibe irreversivelmente a Taq polimerase); separação do plasma por centrifugação em até 4 horas.</p>

Princípios fundamentais da virologia médica e organização físico-química dos agentes virais: natureza acelular dos vírus como parasitas intracelulares obrigatórios estritos desprovidos de metabolismo autônomo e de maquinário ribossomal de síntese proteica; arquitetura macromolecular do virion maduro: genoma viral constituído exclusivamente por um único tipo de ácido nucleico (DNA ou RNA, de fita simples ou dupla, linear, circular ou segmentado); a Classificação de Baltimore como sistema taxonômico padrão baseado no mecanismo de biossíntese de RNA mensageiro (mRNA): Classe I (vírus de DNA fita dupla - dsDNA, ex.: Herpesviridae, Adenoviridae e Poxviridae); Classe II (vírus de DNA fita simples - ssDNA, ex.: Parvoviridae / Parvovírus B19); Classe III (vírus de RNA fita dupla - dsRNA, ex.: Reoviridae / Rotavírus); Classe IV (vírus de RNA fita simples senso positivo - (+)ssRNA cujo genoma atua diretamente como mRNA traduzível pelos ribossomos do hospedeiro, ex.: Flaviviridae / Dengue e Co...